胞外热休克蛋白90α在低氧诱导的非小细胞肺癌侵袭转移中的作用与机制研究

发布时间：2021-02-03 21:45

　　研究背景肺癌是恶性肿瘤中死亡率最高的癌症,非小细胞肺癌（NSCLC）占肺癌中85%左右,在其中占比最高。转移和上皮间充质转化（EMT）是NSCLC恶性进展的重要表现。低氧作为实体瘤的一个特征,与其转移和EMT密切相关。在NSCLC中,低氧现象同样广泛地存在。热休克蛋白90α在肿瘤中表达广泛增高并大量分泌到胞外成为胞外热休克蛋白90α（eHSP90α）。eHSP90α与细胞运动密切相关,同时低氧作为一种应激因素,对促进eHSP90α分泌起重要作用。然而,eHSP90α是否介导低氧诱导的NSCLC细胞转移和EMT尚不清楚。目的探索在低氧中NSCLC细胞系A549细胞的转移和EMT变化,eHSP90α在低氧诱导的NSCLC转移和EMT过程中的作用及其中涉及的机制。方法将NSCLC细胞系A549放到1%02、5%C02和95%N2中建立低氧细胞模型;使用流式细胞术检测细胞的ROS含量;使用HSP90α单克隆抗体抑制胞外HSP90α以及使用人重组HSP90α刺激A549细胞;使用ERK抑制剂和AKT抑制剂抑制ERK和AKT、Transwell试验检测细胞的侵袭与迁移能力、Westem Blot检... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?Ａ５４９细胞在低氧环境下迀移和侵袭能力的变化

否也发生了?ＥＭＴ。??将Ａ５４９细胞放于低氧下培养４８?ｈ后，使用显微镜观察细胞形态的改变，结??果如图２Ａ所示。常氧组细胞的形态为多角形的上皮样细胞，低氧后的细胞变为??细长的长梭形间质样细胞。结果表明低氧能促进细胞从转移能力较差的上皮表??型转变为转移能力较强的间质表型。??为进一步确认Ａ５４９细胞在低氧中是否发生了?ＥＭＴ，继而进一步使用??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ方法检测细胞内ＥＭＴ相关标志蛋白的变化，结果如图２Ｂ所示。??ＨＩＦｌ－ａ指示低氧模型是否成功，低氧组细胞ＨＩＦｌ－ｏｔ表达显著增多，证明低氧细??胞模型制造成功。与细胞应激相关的ＨＳＰ９０ａ蛋白没有明显变化。在ＥＭＴ标志??蛋白中，介导细胞间相互聚集的粘附分子Ｅ－ｃａ显著减少，而参与调节细胞的运??动和增殖的Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和促进癌细胞増殖、转移和浸润的ａ－ＳＭＡ均显著增多。结??果说明Ａ５４９细胞在低氧中确实发生了?ＥＭＴ，细胞间相互黏附的蛋白减少，促??进细胞形变和转移的蛋白却增多，两者综合作用后增大细胞转移的潜能。??Ａ?；？鎮?Ｂ??－黎Ｕ??屬?Ｓ?ＨＳＰ９０ａ??Ｈ?Ｖｉｍｅｎｔｉｎ??？－ＳＭＡ??ＮＣＵＩ？??图２低氧促使Ａ５４９细胞发生ＥＭＴ样改变。（Ａ）?４８?ｈ低氧对细胞形态的改变，细胞??形态图像使用低倍镜（ｌ〇〇ｘ）拍摄。（Ｂ）低氧４８ｈ后

养箱中培养１２?ｈ，观察胞外ＨＳＰ９０的分泌情况。通过超滤收集细胞培养液中的??蛋白，使用Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测胞外的ＨＳＰ９０的蛋白量，通过细胞数量校正蛋白??上样量，结果如图３所示。??Ａ５９４细胞经过１２?ｈ低氧处理后，细胞外ＨＳＰ９０ａ明显升高，同时ＨＳＰ９０Ｐ??也有所升高。此结果说明在低氧１２ｈ后，细胞即分泌ＨＳＰ９０ａ和ＨＳＰ９０Ｐ，导致??细胞外液ＨＳＰ９０ｃｘ和ＨＳＰ９０Ｐ含量显著提高。由于在Ａ５４９细胞中，ＨＩＦ－ｌａ在低??氧后３?ｈ即开始增多，低氧６?ｈ后即达到峰值，因此ＨＳＰ９０的分泌与ＨＩＦ－ｌａ的??上调密切相关。虽然ＨＳＰ９０ａ和ＨＳＰ９０Ｐ在低氧中均被大量分泌到细胞外，但是??ＨＳＰ９０Ｐ并不会促进肿瘤细胞的侵袭迁移［４９］，因此将主要探讨ｅＨＳＰ９０ｔｘ对低氧??促进Ａ５４９细胞侵袭迁移以及ＥＭＴ过程的作用。??ｅＨＳＰ９０ａ?????ｅＨＳＰ９０ｐ?——．??图３低氧促进ＨＳＰ９０ａ和ＨＳＰ９０（３分泌到胞外。低氧处理１２ｈ后，胞外ＨＳＰ９０ａ显著??增多。


本文编号：3017197