应用全基因组小调控RNA文库筛选乳腺癌耐药细胞株及其耐药调控机制研究

发布时间：2021-02-04 01:20

　　目的:乳腺癌是女性中发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,乳腺癌耐药仍是临床治疗中面临的棘手难题。人表皮生长因子受体2（Human Epidermalgrowth Factor Receptor-2,HER2）基因在20-30%乳腺癌病人中呈现高水平表达,其表达水平与乳腺癌不良预后存在高度相关。拉帕替尼（Laptinib）是靶向HER2的乳腺癌主要治疗药物之一,但Laptinib临床耐药严重,影响其治疗效果。大量文献研究表明:小调控RNA（short regulatory RNA,srRNA）在肿瘤细胞耐药中起重要调控作用。为此,我们拟构建全基因组的srRNA文库,并通过该文库快速获得Laptinib耐药的细胞模型,并据此探索HER2阳性乳腺癌Laptinib耐药分子机制,以期寻找干预靶点。方法:以逆转录病毒骨架pSOKD质粒为载体,利用U6/H1双启动子精确控制系统,在两启动子中间将19个随机碱（N19）基采用Gibson Assembly方法组装构建srRNA文库。该文库经过逆转录病毒包装、感染HER2基因高表达的人SKBR3乳腺癌细胞,再通过药物筛选即可建立耐Laptinib的乳腺癌细胞... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 利用GibsonAssembly方法建立小调控RNA（srRNA）文库
    1 材料和方法
    2 结果
    3 讨论
第二部分 基于逆转录病毒系统的小调控RNA文库的包装和SKBR3目的细胞的感染、筛选
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第三部分 SKBR3LN19细胞N19富集片段的收集、测序和单片段验证
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第四部分 SKBR3LN19细胞Laptinib耐药机制的初步探讨
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第五部分 基于不稳定荧光蛋白构建的高通量lncRNAs负向筛选调节器
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
攻读博士学位期间撰写的学术论文和已投稿论文



本文编号：3017475