ADAMTS14在结直肠癌中的表达及作用机制研究

发布时间：2021-02-04 13:27

　　研究背景及目的:结直肠癌是临床中常见的消化系统恶性肿瘤。在我国,其发病率居恶性肿瘤前三位。结直肠癌的发生发展是一个受多个基因、多重步骤调控的复杂过程,其中最重要的三类基因变化为:染色体的不稳定性、微卫星的不稳定和Cp G岛甲基化表型（CIMP）。其中DNA甲基化作为最重要的表观遗传学改变之一,在恶性肿瘤的发生、发展中的作用受到越来越多的重视,尤其是基因启动子区甲基化作为影响基因表达的机制已被广泛研究。近来,Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS）与肿瘤的发生发展及转移之间的关系成为研究热点。其中ADAMTS14基因是在我们前期研究中筛选得到的在食管癌中高甲基化的基因。而作为金属蛋白酶,ADAMTS14在调节细胞与细胞和细胞与基质的相互作用中至关重要。并且在以往研究中发现,ADAMTS家族中的一些成员在多种肿瘤中表达沉默,并且其表达沉默与基因启动子区的甲基化状态有关。因此,我们的研究目的是检测结直肠癌细胞中ADAMTS14启动子区的甲基化水平以... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
Abstract
缩略语
1 引言
2 材料和方法
    2.1 仪器设备和试剂
        2.1.1 仪器设备
        2.1.2 主要生物化学试剂
        2.1.3 主要抗体
    2.2 细胞系和组织样本
        2.2.1 细胞系
        2.2.2 组织样本
    2.3 自配缓冲液的配制方法
        2.3.1 Western Blot10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制
        2.3.2 Western Blot转膜缓冲液的配制
    2.4 实验方法
        2.4.1 细胞DNA抽提
        2.4.2 基因组DNA亚硫酸氢盐转化
        2.4.3 焦磷酸测序
        2.4.4 5-Aza-2’-deoxycytidine（5-Aza-d C）进行细胞系处理
        2.4.5 细胞总RNA提取（TRIzol试剂一步法）
        2.4.6 逆转录与荧光定量PCR
        2.4.7 细胞的迁移侵袭实验
        2.4.8 CCK8检测细胞增殖实验
        2.4.9 细胞凋亡检测
        2.4.10 载体构建
        2.4.11 质粒抽提
        2.4.12 shRNA病毒包装
        2.4.13 Western blot
        2.4.14 免疫组织化学
        2.4.15 实验数据统计方法
3 实验结果
    3.1 人结直肠癌细胞中ADAMTS14 的表达及异常甲基化的研究
        3.1.1 人结直肠癌细胞系中ADAMTS14 启动子区甲基化情况
        3.1.2 ADAMTS14 在人结直肠癌细胞系中的表达情况
    3.2 5-Aza-d C对人结直肠癌细胞ADAMTS14 的表达及甲基化的影响
    3.3 ADAMTS14 在结直肠癌细胞中的功能研究
        3.3.1 ADAMTS14 过表达载体和sh RNA载体的验证
        3.3.2 ADAMTS14 促进结直肠癌细胞的侵袭迁移
        3.3.3 ADAMTS14 对结直肠癌细胞的增殖与凋亡的影响
    3.4 结直肠癌组织中ADAMTS14 的表达情况与预后的研究
4 讨论
5 结论
参考文献
综述 ADAMTS家族在结直肠癌发生发展中的作用及研究进展
    综述参考文献
作者简历及在读期间所取得科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷.  中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]ADAMTS14基因单核苷酸多态性与汉族女性颞下颌关节骨关节炎的相关性研究[J]. 王丹丹,甘业华,马绪臣,孟娟红.  北京大学学报(医学版). 2018(02)
[3]DNA甲基化检测方法及其在肿瘤研究中的应用[J]. 林洁,朱益民,来茂德.  中华病理学杂志. 2009 (02)



本文编号：3018388