上调ALDH2活性抑制肝癌细胞增殖的作用机制研究
发布时间：2021-02-09 05:49
背景和目的根据GLOBOCAN 2018统计数据,目前全球范围内癌症发病率和死亡率依然处于迅速增长阶段。无论是从发病率还是死亡率来看,肝癌都高居榜首,分别达到84万人、78万人。肝癌的发生和众多因素有关,包括乙型肝炎,丙型肝炎,酒精滥用等。众所周知,乙醇已被归类为致癌物质,其代谢产物乙醛是一种极具危险性物质。在乙醛代谢过程中,乙醛脱氢酶2（ALDH2）发挥着重要的作用。它能够将乙醛代谢为乙酸盐,乙酸盐经肠道排出体外,从而消除乙醛的毒性作用。rs671是ALDH2中最常见的突变位点,rs671位点的突变可以显著降低ALDH2的活性,从而减弱其代谢酒精的能力。其突变类型又细分为ALDH2杂合突变（ALDH2*1/*2）和纯合突变类型（ALDH2*2/*2）,分别使其酶活降低至45%和5%。根据现有报道,ALDH2基因突变和肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma cell,HCC）关系仍存在争议。慢性重度饮酒是导致HCC发病的最重要的环境因素之一。而ALDH2基因的突变与环境风险因素相互作用后,能够明显增加HCC的发病。据报道,ALDH2基因在东亚人群中的突变率较高。但是...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１．１?ＡＬＤＨ２在正常肝组织中的表达情况
４８７Ｌｙｓ）?？?ＫＴｕｍａｒ（ｎｏ．ｍｕｔａ）??．■ｓ?Ｉ?■?Ｔｕｍｏｒ（ｎｏ－ｍｕｔａ）?＾?Ｉ?圈?Ｔｕｍｏ『｛Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ｝??■?ｌ??Ｇ??Ｆ?ｉ５〇１?ｒ＾ｚ：——??一?ｕ〇ｉ???■?Ｎｏｒｍａｌ?之?？???１２０Ｊ?丁?Ｔｕｍｏｒｔｎｏ－ｍｕｔａ）?＾?１００＜??．＾ｉ〇〇?｜?■ＴｕｍｏｒｔＧｌｕ４８７Ｌｙｓ）?ｆ??ｉｌ－Ｂ??〇ｉ—??■?－ｉ?■?－?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｈｕｈ－１?ＨｅｐＧ２??图３．１．２?：?ＡＬＤＨ２在肝癌组织和细胞中呈现出低表达和低酶活性。Ａ－Ｂ．组织芯片检测??ＡＬＤＨ２蛋白表达情况。Ｃ－Ｄ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测正常肝组织，ＡＬＤＨ２野生型肝癌组织和??ＡＬＤＨ２＊２肝癌组织中ＡＬＤＨ２蛋白表达情况。Ｅ．?ＲＴ－ＰＣＲ检测这三组中ＡＬＤＨ２?ｍＲＮＡ??水平。Ｆ．ＡＬＤＨ２试剂盒检测这三组标本中ＡＬＤＨ２酶活力情况。ＧＡＬＤＨ２试剂盒检??测肝癌细胞中ＡＬＤＨ２酶活性的表达（Ｖ?＜０．０５，?＊＊尸＜０．０１，＊＊＊尸＜０．００１?）。??３．１．３?ＡＬＤＨ２抑制肝癌细胞的增殖能力和克隆形成能力。??为了确定ＡＬＤＨ２对肝癌细胞的影响，我们运用基因编辑的技术成功构??建了稳定的ＡＬＤＨ２表达细胞株和ＡＬＤＨ２点突变细胞株（如图３．１．３．１Ａ）。??接下来，我们进一步检测了?ＡＬＤＨ２酶活性，结果显示，过表达的ＡＬＤＨ２??细胞株ＡＬＤＨ２活性明显增强，对于ＡＬＤＨ２点突变的细胞株，ＡＬＤＨ２的活??性相对于过表达的细胞株明显减低（如图３．１．３．１Ｂ）。接下来，我们检测了??ＡＬＤＨ２对肝癌细胞
?实验结果???Ｅ?１４０１?Ｉ???１?酬?Ｍｏｃｋ????１?￡?１２０－?＿Ｌ＿?ＡＬＤＨ２??ｌ？１００??ＨｅｐＧ２?丁??ｐ?ｉ：Ｈ???，，?－ＭＯＣＫ??？Ｉ?一１２０?丁?ＡＬＤＨ２（Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ）??－｜３１００－?ＢＩＡＬＤＨ２??Ｈｕｈ－１?■ｓｉ８０?ｔ??Ｌ——ＩＩ?ＩＩ?！！！：■＿．??Ｍｏｃｋ?ＡＬＤＨ２（Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ）?ＡＬＤＨ２?Ｊ??图３．１．３．１?：过表达ＡＬＤＨ２对肝癌细胞增殖的影响。Ａ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ鉴定ＨｅｐＧ２和??Ｈｕｈ－１细胞系的ＡＬＤＨ２过表达和点突变后稳定细胞株ＡＬＤＨ２的表达。Ｂ．?ＡＬＤＨ２过??表达和点突变后ＡＬＤＨ２酶活力的检测。Ｃ．?ＭＴＴ检测过表达ＡＬＤＨ２后对肝癌细胞生??长存活的影响。Ｄ．平板克隆实验检测过表达ＡＬＤＨ２过表达后对细胞生长增殖的影响。??Ｅ．软琼脂克隆实验检测过表达基因后对肝癌细胞集落形成能力和增殖能力的影响??（＊ｐ＜０．０５；?＊＊ｐ＜０．０１；?＊＊＊／？＜０．００１?）。??Ａ?Ｂ??，Ｓ９ＲＮＡ??／?＼?＾?＼?Ｍｏｃｋ?＃１?＃２?Ｍ??［ｒ?＾?Ｖ）?＿２瞻＿…＇??、?ｊ?Ｍ＾ｃｔｌｎ?？？??Ｃ?Ｄ??ＨｅｐＧ２?ＨｅｐＧ２???ｔ??０．８ｉ??１５０－１??ｊ??ＩＨＭｏｃｋ?”?＋?Ｍｏｃｋ??１?Ｈ?－Ｓ９＃１?Ｉ０－６＇?Ａ?：：??Ｉ?１〇°＇?ｍ?ｌ?ｆ?＾?ＡＬＤＨ２??ＩＪ?；ｖ??〇Ｊ－＾Ｈ????ＯＨ?２４Ｈ?４８Ｈ?７２Ｈ??图３．１．３．２?：敲除ＡＬＤＨ２
【参考文献】：
期刊论文
[1]p53和γ-H2AX作为乙醛引起DNA损伤早期生物标记物的实验研究[J]. 周学贤,Penny Jones,Paul Carmichael,郝卫东. 癌变.畸变.突变. 2014(02)
本文编号：3025154
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１．１?ＡＬＤＨ２在正常肝组织中的表达情况
４８７Ｌｙｓ）?？?ＫＴｕｍａｒ（ｎｏ．ｍｕｔａ）??．■ｓ?Ｉ?■?Ｔｕｍｏｒ（ｎｏ－ｍｕｔａ）?＾?Ｉ?圈?Ｔｕｍｏ『｛Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ｝??■?ｌ??Ｇ??Ｆ?ｉ５〇１?ｒ＾ｚ：——??一?ｕ〇ｉ???■?Ｎｏｒｍａｌ?之?？???１２０Ｊ?丁?Ｔｕｍｏｒｔｎｏ－ｍｕｔａ）?＾?１００＜??．＾ｉ〇〇?｜?■ＴｕｍｏｒｔＧｌｕ４８７Ｌｙｓ）?ｆ??ｉｌ－Ｂ??〇ｉ—??■?－ｉ?■?－?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｈｕｈ－１?ＨｅｐＧ２??图３．１．２?：?ＡＬＤＨ２在肝癌组织和细胞中呈现出低表达和低酶活性。Ａ－Ｂ．组织芯片检测??ＡＬＤＨ２蛋白表达情况。Ｃ－Ｄ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测正常肝组织，ＡＬＤＨ２野生型肝癌组织和??ＡＬＤＨ２＊２肝癌组织中ＡＬＤＨ２蛋白表达情况。Ｅ．?ＲＴ－ＰＣＲ检测这三组中ＡＬＤＨ２?ｍＲＮＡ??水平。Ｆ．ＡＬＤＨ２试剂盒检测这三组标本中ＡＬＤＨ２酶活力情况。ＧＡＬＤＨ２试剂盒检??测肝癌细胞中ＡＬＤＨ２酶活性的表达（Ｖ?＜０．０５，?＊＊尸＜０．０１，＊＊＊尸＜０．００１?）。??３．１．３?ＡＬＤＨ２抑制肝癌细胞的增殖能力和克隆形成能力。??为了确定ＡＬＤＨ２对肝癌细胞的影响，我们运用基因编辑的技术成功构??建了稳定的ＡＬＤＨ２表达细胞株和ＡＬＤＨ２点突变细胞株（如图３．１．３．１Ａ）。??接下来，我们进一步检测了?ＡＬＤＨ２酶活性，结果显示，过表达的ＡＬＤＨ２??细胞株ＡＬＤＨ２活性明显增强，对于ＡＬＤＨ２点突变的细胞株，ＡＬＤＨ２的活??性相对于过表达的细胞株明显减低（如图３．１．３．１Ｂ）。接下来，我们检测了??ＡＬＤＨ２对肝癌细胞
?实验结果???Ｅ?１４０１?Ｉ???１?酬?Ｍｏｃｋ????１?￡?１２０－?＿Ｌ＿?ＡＬＤＨ２??ｌ？１００??ＨｅｐＧ２?丁??ｐ?ｉ：Ｈ???，，?－ＭＯＣＫ??？Ｉ?一１２０?丁?ＡＬＤＨ２（Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ）??－｜３１００－?ＢＩＡＬＤＨ２??Ｈｕｈ－１?■ｓｉ８０?ｔ??Ｌ——ＩＩ?ＩＩ?！！！：■＿．??Ｍｏｃｋ?ＡＬＤＨ２（Ｇｌｕ４８７Ｌｙｓ）?ＡＬＤＨ２?Ｊ??图３．１．３．１?：过表达ＡＬＤＨ２对肝癌细胞增殖的影响。Ａ．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ鉴定ＨｅｐＧ２和??Ｈｕｈ－１细胞系的ＡＬＤＨ２过表达和点突变后稳定细胞株ＡＬＤＨ２的表达。Ｂ．?ＡＬＤＨ２过??表达和点突变后ＡＬＤＨ２酶活力的检测。Ｃ．?ＭＴＴ检测过表达ＡＬＤＨ２后对肝癌细胞生??长存活的影响。Ｄ．平板克隆实验检测过表达ＡＬＤＨ２过表达后对细胞生长增殖的影响。??Ｅ．软琼脂克隆实验检测过表达基因后对肝癌细胞集落形成能力和增殖能力的影响??（＊ｐ＜０．０５；?＊＊ｐ＜０．０１；?＊＊＊／？＜０．００１?）。??Ａ?Ｂ??，Ｓ９ＲＮＡ??／?＼?＾?＼?Ｍｏｃｋ?＃１?＃２?Ｍ??［ｒ?＾?Ｖ）?＿２瞻＿…＇??、?ｊ?Ｍ＾ｃｔｌｎ?？？??Ｃ?Ｄ??ＨｅｐＧ２?ＨｅｐＧ２???ｔ??０．８ｉ??１５０－１??ｊ??ＩＨＭｏｃｋ?”?＋?Ｍｏｃｋ??１?Ｈ?－Ｓ９＃１?Ｉ０－６＇?Ａ?：：??Ｉ?１〇°＇?ｍ?ｌ?ｆ?＾?ＡＬＤＨ２??ＩＪ?；ｖ??〇Ｊ－＾Ｈ????ＯＨ?２４Ｈ?４８Ｈ?７２Ｈ??图３．１．３．２?：敲除ＡＬＤＨ２
【参考文献】：
期刊论文
[1]p53和γ-H2AX作为乙醛引起DNA损伤早期生物标记物的实验研究[J]. 周学贤,Penny Jones,Paul Carmichael,郝卫东. 癌变.畸变.突变. 2014(02)
本文编号：3025154
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3025154.html
