TRAF2通过TRAF4泛素化激活Akt信号通路促进乳腺癌的侵袭转移
发布时间：2021-02-10 09:25
目的:乳腺癌是21世纪女性恶性肿瘤中高发的一种,探究乳腺癌的病因以发生发展的分子机制并确定早期诊断乳腺癌的标记物和靶向药物将是解决这一难题的关键所在。肿瘤坏死因子受体相关因子（tumor necrosis factor receptor associated factors,TRAFs）是重要的胞浆衔接蛋白,其家族包含7个成员,参与调节NF-κB、JNK等多种信号传导通路。TRAF2作为TRAFs家族的经典成员之一,在多种肿瘤中高表达。我们发现TRAF2促进p70s6k信号通路的活化,乳腺癌细胞系MCF-7中上调TRAF2表达可激活NF-κB激活核转位从而抑制乳腺癌细胞的凋亡。Akt又称蛋白激酶B（protein kinase B,PKB）,作为肿瘤细胞内重要的信号转导通路,调控细胞生长与增殖,其异常的持续性活化与肿瘤的发生、发展关系密切。研究发现Lys63连接的泛素化修饰,能够促进Akt活化。TRAF家族成员TRAF4具有E3泛素连接酶活性,能够介导Akt发生泛素化活化。我们研究发现TRAF2可以与TRAF4结合并调控TRAF4的核浆分布,于是我们猜测,TRAF2是否可以通过调控TR...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
TRAF2和Akt在乳腺癌组织和细胞系中高表达
图 2. TRAF2 通过 Akt 信号通路促进乳腺癌细胞迁移侵袭，抑制凋亡(A)流式细胞仪检测发现，转染 TRAF2 后，MCF-7 细胞的凋亡数降低；下调 Akt 表达后，细胞的凋亡率显著增加，共转染 TRAF2 和 si-Akt 后显著抑制了 TRAF2 上调所引起的 MCF-7 细胞凋亡细胞数的增加。(BC)划痕实验和 Transwell 实验显示了 Akt 在 TRAF2 促进 MCF-7 细胞的迁移侵袭能力中起到重要作用。
图 1. TRAF2 激活 Akt 信号通路(A) TRAF2 促进 Akt 的磷酸化。Western blot 结果显示，在 MCF-7 细胞中上调 TRAF2 表达，Akt 磷酸化水平明显增加。(B)免疫荧光检测显示：在 MCF-7 细胞中转染 TRAF2 后 p-Akt 的荧光强度增强，Bars: 20μm。(C) EGF 诱导 Akt 的磷酸化活化。Western blot 显示，MCF-7 细胞经EGF(50ng/ml)处理后，在不同时间点收细胞，Akt 磷酸化水平随着时间梯度表达上调。(DE)Western blot 显示，在 MCF-7 和 BT-549 细胞中，经 EGF(50ng/ml)不同时间点的处理后，上调TRAF2 表达可以增强 Akt 磷酸化水平的表达。 (FG) Western blot 显示，在 MCF-7 和 BT-549细胞中，经 EGF(50ng/ml)不同时间点的处理后，下调 TRAF2 表达可以降低 Akt 磷酸化水平的表达。3.2 TRAF2 上调乳腺癌细胞中 AKT 泛素化水平接下来我们进一步检测，TRAF2 是否可以调控 Akt 的泛素化水平。于是我们通过泛素化实验，在乳腺癌 MCF-7 细胞中上调 TRAF2 的表达，发现 AKT 的泛素化
【参考文献】：
期刊论文
[1]宫颈癌组织TRAF2表达及其临床意义[J]. 张怡,叶佩卿,袁秋玮,郭圣为,陈豪,应香岚. 浙江中西医结合杂志. 2012(04)
[2]TRAF2在乳腺癌中的表达及与乳腺癌侵袭性的关系[J]. 王士娜,米小轶,刘楠,方长青,滕月娥,赵润秋. 中国医科大学学报. 2008(05)
[3]TRAF4蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义[J]. 代文博,郑英伟,米小轶,刘楠,林红,闫俊. 癌症. 2007(10)
[4]肿瘤坏死因子受体及其信号转导蛋白TRAF2在喉癌中的表达[J]. 徐海洋,路秀英,马婧,李晓明. 吉林大学学报(医学版). 2006(02)
[5]EB病毒潜伏膜蛋白1通过结合TRAFs调控NF-κB[J]. 王承兴,李晓艳,顾焕华,邓锡云,曹亚. 生物化学与生物物理进展. 2001(02)
本文编号：3027149
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
TRAF2和Akt在乳腺癌组织和细胞系中高表达
图 2. TRAF2 通过 Akt 信号通路促进乳腺癌细胞迁移侵袭，抑制凋亡(A)流式细胞仪检测发现，转染 TRAF2 后，MCF-7 细胞的凋亡数降低；下调 Akt 表达后，细胞的凋亡率显著增加，共转染 TRAF2 和 si-Akt 后显著抑制了 TRAF2 上调所引起的 MCF-7 细胞凋亡细胞数的增加。(BC)划痕实验和 Transwell 实验显示了 Akt 在 TRAF2 促进 MCF-7 细胞的迁移侵袭能力中起到重要作用。
图 1. TRAF2 激活 Akt 信号通路(A) TRAF2 促进 Akt 的磷酸化。Western blot 结果显示，在 MCF-7 细胞中上调 TRAF2 表达，Akt 磷酸化水平明显增加。(B)免疫荧光检测显示：在 MCF-7 细胞中转染 TRAF2 后 p-Akt 的荧光强度增强，Bars: 20μm。(C) EGF 诱导 Akt 的磷酸化活化。Western blot 显示，MCF-7 细胞经EGF(50ng/ml)处理后，在不同时间点收细胞，Akt 磷酸化水平随着时间梯度表达上调。(DE)Western blot 显示，在 MCF-7 和 BT-549 细胞中，经 EGF(50ng/ml)不同时间点的处理后，上调TRAF2 表达可以增强 Akt 磷酸化水平的表达。 (FG) Western blot 显示，在 MCF-7 和 BT-549细胞中，经 EGF(50ng/ml)不同时间点的处理后，下调 TRAF2 表达可以降低 Akt 磷酸化水平的表达。3.2 TRAF2 上调乳腺癌细胞中 AKT 泛素化水平接下来我们进一步检测，TRAF2 是否可以调控 Akt 的泛素化水平。于是我们通过泛素化实验，在乳腺癌 MCF-7 细胞中上调 TRAF2 的表达，发现 AKT 的泛素化
【参考文献】：
期刊论文
[1]宫颈癌组织TRAF2表达及其临床意义[J]. 张怡,叶佩卿,袁秋玮,郭圣为,陈豪,应香岚. 浙江中西医结合杂志. 2012(04)
[2]TRAF2在乳腺癌中的表达及与乳腺癌侵袭性的关系[J]. 王士娜,米小轶,刘楠,方长青,滕月娥,赵润秋. 中国医科大学学报. 2008(05)
[3]TRAF4蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义[J]. 代文博,郑英伟,米小轶,刘楠,林红,闫俊. 癌症. 2007(10)
[4]肿瘤坏死因子受体及其信号转导蛋白TRAF2在喉癌中的表达[J]. 徐海洋,路秀英,马婧,李晓明. 吉林大学学报(医学版). 2006(02)
[5]EB病毒潜伏膜蛋白1通过结合TRAFs调控NF-κB[J]. 王承兴,李晓艳,顾焕华,邓锡云,曹亚. 生物化学与生物物理进展. 2001(02)
本文编号：3027149
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