生物钟蛋白REV-ERB激动剂SR9009对小细胞肺癌的作用及机制研究
发布时间：2021-02-20 13:02
[研究背景]小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）是一种恶性程度极高的肿瘤,标准治疗手段为化疗,但患者往往容易对化疗药产生抗性,导致治疗失败,因此需要探索一种新的治疗策略。生物钟在调节细胞增殖和新陈代谢,影响疾病的发生发展中发挥着重要作用,尤其是与肿瘤的形成密切相关,药物干预肿瘤细胞的生物钟蛋白可能是治疗肿瘤的有效治疗方法。SR9009是REV-ERB蛋白（一种基本的生物钟组件）的特定合成靶向激动剂,有研究表明SR9009可以通过对生物钟蛋白REV-ERB的药理作用调节自噬过程从而杀伤神经胶质瘤等肿瘤,但具体分子调控机制尚未完全阐明,而该药物在小细胞肺癌（SCLC）中的抗肿瘤作用及机制还未有报道,值得进一步探究。[研究方法]1、利用化疗敏感细胞（H69和H446）以及相应的化疗耐药细胞（H69AR和H446DDP）来评估REV-ERB激动剂SR9009对小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响,并进一步验证其在小细胞肺癌皮下成瘤模型中的抗肿瘤作用。2、采用免疫印迹实验（Western Blot）和实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time ...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－４?ＳＲ９００９在体内对小细胞肺癌表现出显著的抗肿瘤作用
?第二章?ＳＲ９００９通过激活ＲＥＶ－ＥＲＢ蛋白抑制自噬进而发挥抗肿瘤作用???（图２－１Ｄ、Ｅ?），ＳＲ９００９对小细胞肺癌细胞的杀伤作用在ＲＥＶ－ＥＲＢａ被下调??后部分减弱（图２－１?Ｆ、Ｇ）。这些结果表明，生物钟蛋白ＲＥＶ－ＥＲＢａ参与ＳＲ９００９??抗小细胞肺癌作用。??Ａ?Ｂ??，?Ｈ６９ＡＲ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｕＭ＞?１．５，?ＲＥＶ－ＥＲＢａ??，＃?Ｚ，／?ＲＥＶ－ＥＲＢａ?４?ｊｉｔ?Ｓ?？?１＾１．０?Ａ??，明。？鰣■麵?ｐ－ａｃｔｉｎ?？！?＇?Ｉ?Ｉ??ＲＥＶＥＲＢＳ??ＲＥＶ?ＥＲＢＰ?Ｗｆｒ?？？＊?１５?ＳＲ９００９（ｍＭ）??Ｐ?Ｈ４４ｆｉｎｎｐ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｐＭ）?＝?＾?ＲＥＶ－ＥＲＢａ??０?１．２５?２．５?５￣Ｔｏ＂?｜｜?１．０?［ｆｉｎ?［ｒｌ?ＰＩ?ｒｎ??ＲＥＶ－ＥＲＢａ?ｍｍ?ｍｍ?？?Ｉ??＾?？１?Ｉ?ｇ?０．５．?■??ｐ－ａｃｔｉｎ??鬥?ｕＣＱＡＤ?〇〇Ｈ＾ｆ平Ｉｆ－??ｐ?□?Ｈ６９ＡＲ?ＳＲ９００９（（ＪＭ）??＾?１５１?□?Ｈ６９ＡＲ＋ＳＲ９００９．?＾??１０］?口?Ｈ４４６ＤＤＰ??．２?Ｘ?．２?□?Ｈ４４６ＤＤＰ＋ＳＲ９００９??ｉ１〇－?Ｈｉ?ｍ?ｉ?＾??艺?Ｔ?＾??〇?ｒ－Ｕ?５?ｊＪＬ．??芯?０．５＿?％?０．５－??１?ｎ?１?ｉ?ｎ??〇〇＿！＿！?Ｌ－ｒＪ???Ｌｐｌ?１—?０．０－１—１?Ｍ???Ｍ???ＢｍａＭ?Ｃｌｏｃｋ?Ｂｍａ＂?Ｃｌｏｃｋ??Ｄ?Ｅ?，ｙ，??｜?１５＂?Ｈ６９ＡＲ
ａ蛋白的下游靶标??ＲＥＶ－ＥＲＢａ可以通过与其下游基因启动子结合来抑制靶基因转录。已有研??究报道过ＲＥＶ－ＥＲＢａ可以通过调节自噬基因ＵＬＫ１抑制斑马鱼的自噬活性［３２１。??然而，这种机制在小细胞肺癌中是否有效尚不清楚。我们从Ｃｈｉｐ－ｓｅｑ的结果得??出，核心自噬基因?ＡＴＧ５，?ＡＴＧ２Ａ，ＡＴＧ４Ｃ，ＡＴＧ７，?ＡＴＧ１３，?ＡＴＧ１６Ｌ１，ＡＴＧ１０１，??ＡＭＢＲＡ１，ＤＲＡＭ２和Ｕｌｋｌ都存在峰值，表明ＲＥＶ－ＥＲＢａ可能与小细胞肺癌细??胞中自噬基因的启动子结合（图２－２?Ａ）。为了寻找ＲＥＶ－ＥＲＢａ直接结合的自噬??基因，我们进行细胞学验证，用ＳＲ９００９处理Ｈ６９ＡＲ细胞后通过ＱＲＴ－ＰＣＲ实??验得出ＡＴＧ５，ＡＴＧ２Ａ，ＡＴＧ７，ＡＴＧ１６Ｌ１和ＡＴＧ１０１等基因的表达均被明显??抑制（图２－２?Ｂ）；进一步在Ｈ４４６ＤＤＰ细胞验证，用ＳＲ９００９处理Ｈ４４６ＤＤＰ细??胞后再次利用ＱＲＴ－ＰＣＲ实验证实，与对照组相比，ＳＲ９００９作用后的细胞中??ＡＴＧ５的表达被显著抑制（图２－２?Ｃ）。结合两株小细胞肺癌细胞的实验结果可??以得出核心自噬基因ＡＴＧ５是ＲＥＶ－ＥＲＢａ蛋白的下游靶基因。??Ａ??ＣｎｔｗｒＭｏｎｎｒ?ｔ?Ｐｅａｋ?Ｃｈｒｏｍｏ？ｏｍ＊?１１??Ｐ＊＊ｋ？?Ｐ？？ｋ？?■??ＮＲ１０１??‘‘ＩＩ＊?．ｘ．?－ｉ?ｋ．?．?Ｌ?ｉ?Ａ?．ｉｉ．＿?—?ｋｔ．?＿?＿?－?．?－?．?Ａ?．?ＮＲ１Ｄ１?瀛?＞？?－?ｌＡＡＡ?Ｊｋｉ?．?ｔｉ??ｌｏｐｕ，?．?．?．?．?，ｎｐｕ，?ｔ?ｉ?■?？ｍ?ｉ?ｎ?（ｉ?？？？?？ｉ?ａｉ?
本文编号：3042809
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－４?ＳＲ９００９在体内对小细胞肺癌表现出显著的抗肿瘤作用
?第二章?ＳＲ９００９通过激活ＲＥＶ－ＥＲＢ蛋白抑制自噬进而发挥抗肿瘤作用???（图２－１Ｄ、Ｅ?），ＳＲ９００９对小细胞肺癌细胞的杀伤作用在ＲＥＶ－ＥＲＢａ被下调??后部分减弱（图２－１?Ｆ、Ｇ）。这些结果表明，生物钟蛋白ＲＥＶ－ＥＲＢａ参与ＳＲ９００９??抗小细胞肺癌作用。??Ａ?Ｂ??，?Ｈ６９ＡＲ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｕＭ＞?１．５，?ＲＥＶ－ＥＲＢａ??，＃?Ｚ，／?ＲＥＶ－ＥＲＢａ?４?ｊｉｔ?Ｓ?？?１＾１．０?Ａ??，明。？鰣■麵?ｐ－ａｃｔｉｎ?？！?＇?Ｉ?Ｉ??ＲＥＶＥＲＢＳ??ＲＥＶ?ＥＲＢＰ?Ｗｆｒ?？？＊?１５?ＳＲ９００９（ｍＭ）??Ｐ?Ｈ４４ｆｉｎｎｐ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｐＭ）?＝?＾?ＲＥＶ－ＥＲＢａ??０?１．２５?２．５?５￣Ｔｏ＂?｜｜?１．０?［ｆｉｎ?［ｒｌ?ＰＩ?ｒｎ??ＲＥＶ－ＥＲＢａ?ｍｍ?ｍｍ?？?Ｉ??＾?？１?Ｉ?ｇ?０．５．?■??ｐ－ａｃｔｉｎ??鬥?ｕＣＱＡＤ?〇〇Ｈ＾ｆ平Ｉｆ－??ｐ?□?Ｈ６９ＡＲ?ＳＲ９００９（（ＪＭ）??＾?１５１?□?Ｈ６９ＡＲ＋ＳＲ９００９．?＾??１０］?口?Ｈ４４６ＤＤＰ??．２?Ｘ?．２?□?Ｈ４４６ＤＤＰ＋ＳＲ９００９??ｉ１〇－?Ｈｉ?ｍ?ｉ?＾??艺?Ｔ?＾??〇?ｒ－Ｕ?５?ｊＪＬ．??芯?０．５＿?％?０．５－??１?ｎ?１?ｉ?ｎ??〇〇＿！＿！?Ｌ－ｒＪ???Ｌｐｌ?１—?０．０－１—１?Ｍ???Ｍ???ＢｍａＭ?Ｃｌｏｃｋ?Ｂｍａ＂?Ｃｌｏｃｋ??Ｄ?Ｅ?，ｙ，??｜?１５＂?Ｈ６９ＡＲ
ａ蛋白的下游靶标??ＲＥＶ－ＥＲＢａ可以通过与其下游基因启动子结合来抑制靶基因转录。已有研??究报道过ＲＥＶ－ＥＲＢａ可以通过调节自噬基因ＵＬＫ１抑制斑马鱼的自噬活性［３２１。??然而，这种机制在小细胞肺癌中是否有效尚不清楚。我们从Ｃｈｉｐ－ｓｅｑ的结果得??出，核心自噬基因?ＡＴＧ５，?ＡＴＧ２Ａ，ＡＴＧ４Ｃ，ＡＴＧ７，?ＡＴＧ１３，?ＡＴＧ１６Ｌ１，ＡＴＧ１０１，??ＡＭＢＲＡ１，ＤＲＡＭ２和Ｕｌｋｌ都存在峰值，表明ＲＥＶ－ＥＲＢａ可能与小细胞肺癌细??胞中自噬基因的启动子结合（图２－２?Ａ）。为了寻找ＲＥＶ－ＥＲＢａ直接结合的自噬??基因，我们进行细胞学验证，用ＳＲ９００９处理Ｈ６９ＡＲ细胞后通过ＱＲＴ－ＰＣＲ实??验得出ＡＴＧ５，ＡＴＧ２Ａ，ＡＴＧ７，ＡＴＧ１６Ｌ１和ＡＴＧ１０１等基因的表达均被明显??抑制（图２－２?Ｂ）；进一步在Ｈ４４６ＤＤＰ细胞验证，用ＳＲ９００９处理Ｈ４４６ＤＤＰ细??胞后再次利用ＱＲＴ－ＰＣＲ实验证实，与对照组相比，ＳＲ９００９作用后的细胞中??ＡＴＧ５的表达被显著抑制（图２－２?Ｃ）。结合两株小细胞肺癌细胞的实验结果可??以得出核心自噬基因ＡＴＧ５是ＲＥＶ－ＥＲＢａ蛋白的下游靶基因。??Ａ??ＣｎｔｗｒＭｏｎｎｒ?ｔ?Ｐｅａｋ?Ｃｈｒｏｍｏ？ｏｍ＊?１１??Ｐ＊＊ｋ？?Ｐ？？ｋ？?■??ＮＲ１０１??‘‘ＩＩ＊?．ｘ．?－ｉ?ｋ．?．?Ｌ?ｉ?Ａ?．ｉｉ．＿?—?ｋｔ．?＿?＿?－?．?－?．?Ａ?．?ＮＲ１Ｄ１?瀛?＞？?－?ｌＡＡＡ?Ｊｋｉ?．?ｔｉ??ｌｏｐｕ，?．?．?．?．?，ｎｐｕ，?ｔ?ｉ?■?？ｍ?ｉ?ｎ?（ｉ?？？？?？ｉ?ａｉ?
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