葫芦素B对胰腺癌细胞杀伤作用及相关机制研究
发布时间：2021-02-21 03:44
第一部分:共同抑制EGFR PI3K/Akt/mTOR STAT3和ERK信号,协同抗胰腺癌活性的研究目的目前关于葫芦素B抗肿瘤作用的研究显示,信号转导和转录因子3（signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）是其主要治疗靶点,但葫芦素B也能够选择性抑制其他信号通路。例如,在乳腺癌和肺癌细胞中,葫芦素B能够抑制人表皮生长因子受体（human epidermal growth factor receptor,EGFR and HER2）的表达和活性。研究发现,表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）在胰腺癌发展过程中起着关键作用,并且在30%–89%的胰腺癌患者中呈现高表达。因此,EGFR可能是胰腺癌的潜在治疗靶点。但临床应用中发现,EGFR抑制剂不足以有效治疗胰腺癌患者,这可能是由于EGFR下游信号通路的持续激活,或者负反馈的发生。因此,以阻断EGFR及其下游信号传导为目标可能是胰腺癌治疗的策略。本部分主要研究葫芦素B对EGFR活性以及下信号通路的影响,同时考察联...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图3.24株PC细胞中CuB的IC50值
图 3.4 葫芦素 B 对细胞死亡的影响。ABxPC-3 细胞和 HPAC 细胞用不同浓度的 CuB 处理 24h 后，用台盼蓝染色计数法检测细胞死亡的百分比。BBxPC-3 细胞和 HPAC 细胞用不同浓度的 CuB 处理 24 h 后,用 LDH 检测试剂盒检测 LDH 的释放。C BxPC-3 细胞和 HPAC细胞用不同浓度的 CuB 处理 24 h 后，用 80％的冰乙醇固定、PI 染色后后流式细胞仪检测sub-G1 细胞。D CuB 处理 BxPC-3 细胞和 HPAC 细胞 24 h 后，用 Western blot 检测 PARP 和β-actin 的表达水平。以上进行 3 次独立的实验，并显示了具代表性的 Western blots。3.5 葫芦素 B 通过下调 EGFR 表达抑制胰腺癌细胞增殖3.5.1 B EGFR根据 3.1 和 3.2 的结果，我们推测 CuB 抑制胰腺癌细胞的增殖可能与 EGFR表达降低相关。用不同浓度的 CuB 处理 BxPC-3 和 HPAC 24 h 细胞后，提取细胞 RNA 进行实时定量 PCR 的检测。结果发现，在该 2 株 PC 细胞株中，CuB 以浓度依赖的方式抑制 EGFR 的表达 (图 3.5.1)。
3.5.1 葫芦素 B 抑制 EGFR 基因的表达。用不同浓度的 CuB 处理 BxPC-3 细胞 h 后，提取细胞的 RNA 并用实时定量 PCR 检测 EGFR 的表达水平。图中立实验的平均值，组间比较使用单因素方差分析，***P < 0.001。GFR 基因参与了葫芦素 B 抑制胰腺癌细胞增殖了提供更直接的证据证明 EGFR 基因的表达参与了 CuB 抑制 PC我们在 BxPC-3 和 HPAC 细胞中用慢病毒 shRNA 分别沉默了 EG其对 CuB 引起的细胞增殖的影响。实验结果显示，与对照组相比够抑制细胞的增殖 (图 3.5.2A)。与对照组细胞相比，不同浓度 C抑制 EGFR 敲除后 HPAC 细胞增殖，但只有低浓度的 CuB 才能显 敲除后 BxPC-3 细胞增殖 (图 3.5.2 B＆C)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]葫芦素I（JSI-124）通过p53信号通路诱导HepG2细胞凋亡[J]. 吴思思,朱国念,倪银芸,张庭恺,蒋维. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(01)
[2]Mechanisms of resistance to EGFR tyrosine kinase inhibitors[J]. Lihua Huang,Liwu Fu. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(05)
[3]Inhibitory Effects of miR-146b-5p on Cell Migration and Invasion of Pancreatic Cancer by Targeting MMP16[J]. 林凡,王欣,揭志刚,洪晓泉,李旭,王敏,俞亚红. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2011(04)
[4]葫芦素的生态功能及其应用前景[J]. 凌冰,张茂新,王玉赞. 生态学报. 2010(03)
本文编号：3043794
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图3.24株PC细胞中CuB的IC50值
图 3.4 葫芦素 B 对细胞死亡的影响。ABxPC-3 细胞和 HPAC 细胞用不同浓度的 CuB 处理 24h 后，用台盼蓝染色计数法检测细胞死亡的百分比。BBxPC-3 细胞和 HPAC 细胞用不同浓度的 CuB 处理 24 h 后,用 LDH 检测试剂盒检测 LDH 的释放。C BxPC-3 细胞和 HPAC细胞用不同浓度的 CuB 处理 24 h 后，用 80％的冰乙醇固定、PI 染色后后流式细胞仪检测sub-G1 细胞。D CuB 处理 BxPC-3 细胞和 HPAC 细胞 24 h 后，用 Western blot 检测 PARP 和β-actin 的表达水平。以上进行 3 次独立的实验，并显示了具代表性的 Western blots。3.5 葫芦素 B 通过下调 EGFR 表达抑制胰腺癌细胞增殖3.5.1 B EGFR根据 3.1 和 3.2 的结果，我们推测 CuB 抑制胰腺癌细胞的增殖可能与 EGFR表达降低相关。用不同浓度的 CuB 处理 BxPC-3 和 HPAC 24 h 细胞后，提取细胞 RNA 进行实时定量 PCR 的检测。结果发现，在该 2 株 PC 细胞株中，CuB 以浓度依赖的方式抑制 EGFR 的表达 (图 3.5.1)。
3.5.1 葫芦素 B 抑制 EGFR 基因的表达。用不同浓度的 CuB 处理 BxPC-3 细胞 h 后，提取细胞的 RNA 并用实时定量 PCR 检测 EGFR 的表达水平。图中立实验的平均值，组间比较使用单因素方差分析，***P < 0.001。GFR 基因参与了葫芦素 B 抑制胰腺癌细胞增殖了提供更直接的证据证明 EGFR 基因的表达参与了 CuB 抑制 PC我们在 BxPC-3 和 HPAC 细胞中用慢病毒 shRNA 分别沉默了 EG其对 CuB 引起的细胞增殖的影响。实验结果显示，与对照组相比够抑制细胞的增殖 (图 3.5.2A)。与对照组细胞相比，不同浓度 C抑制 EGFR 敲除后 HPAC 细胞增殖，但只有低浓度的 CuB 才能显 敲除后 BxPC-3 细胞增殖 (图 3.5.2 B＆C)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]葫芦素I（JSI-124）通过p53信号通路诱导HepG2细胞凋亡[J]. 吴思思,朱国念,倪银芸,张庭恺,蒋维. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(01)
[2]Mechanisms of resistance to EGFR tyrosine kinase inhibitors[J]. Lihua Huang,Liwu Fu. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(05)
[3]Inhibitory Effects of miR-146b-5p on Cell Migration and Invasion of Pancreatic Cancer by Targeting MMP16[J]. 林凡,王欣,揭志刚,洪晓泉,李旭,王敏,俞亚红. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2011(04)
[4]葫芦素的生态功能及其应用前景[J]. 凌冰,张茂新,王玉赞. 生态学报. 2010(03)
本文编号：3043794
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