FGFR抑制剂PRN1371联合吉非替尼抑制非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药及机制研究
发布时间：2021-02-26 05:08
恶性肿瘤是严重威胁我国居民健康的重大疾病。近年来,随着精准医学的不断发展,肿瘤的诊治模式已发生了翻天覆地的变化,肿瘤患者的临床获益也取得了令人鼓舞的提高。以EGFR敏感突变的非小细胞肺癌（Non-small cell lung carcinoma,NSCLC）以例,相比于传统的化学治疗,经EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）治疗的无进展生存时间（PFS）已由过去的6个月提高至近20个月。然而即便TKI药物的有效反应率已高达70%,但随着治疗时间的延长,仍不可避免地发生耐药性的问题。及早发现耐药并及时更换治疗方案已成为提升肿瘤患者生存的关键。现有方法与资料表明,目前临床上TKI药物耐药性检测方法的灵敏度较低（1%左右）,同时对样本需求量高（穿刺样本量通常不高）,已不满足部分特殊病患的需求。一种多重、灵敏、便捷的耐药性检测方法能够提前及时发现耐药性,对于用药指导以及预后具有很高的临床意义。因此耐药性检测方法仍是一个急需解决的临床难题。根据耐药性的分子机制进行后续针对性治疗是精准医疗的重要内容,然而耐药性发生后的分子变异是相当复杂的。现仍有15-30%病例的TKI耐药机制尚不清楚。先...
【文章来源】：河北医科大学河北省
【文章页数】：117 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
数字PCR实验流程图
连接反应的温度是保证连接效率最为重要的因素之一。我们通过NEB公司的Thermostable Ligase Reaction Temperature Calculator v0.8.4在线工具(http://ligasecalc.neb.com/#!/ligation)来预测连接的最适温度。在本研究中43℃是比较理想的连接反应温度。利用荧光定量PCR对锁式探针的浓度梯度进行比较研究发现,0.1 pM是比较理想的浓度(图1)。3 MPRP方法的特异性与灵敏度
为研究MPRP反应的可行性与特异性,三组锁式突变探针被设计用来在锁式RCA反应中检测三组含有突变的模板。探针pEG858A与pEG858C分别匹配模板tEG858T与tEG858G。同样,探针pEG790G与pEG790A分别匹配模板tEG790C与tEG790T;探针pBR600A与pBR600T分别匹配模板tBR600T与tBR600A。(序列见表2)在多重定量PCR反应中使用一对通用引物与三条标记有不同荧光基团的荧光探针来实现多重检测(MPRP示意图见图3)。结果如表2所示,当锁式突变探针与突变模板完全匹配时,MPRP反应所检测到的突变模板CT值分别达到9.74±0.565、7.99±0.143和15.27±0.243(图2)。在野生模板中并未观察到CT值。这结果证明利用MPRP反应检测多重突变是可行并且特异的。
【参考文献】：
期刊论文
[1]FGFR1抑制剂PD173074经诱导自噬逆转人肺腺癌HCC827细胞对厄罗替尼耐药[J]. 刘勇世,张志培,赖远阳,李小飞,王小平,雷杰. 临床与病理杂志. 2019(11)
[2]奥希替尼治疗EGFR T790M阳性非小细胞肺癌的临床疗效[J]. 王如坤,张振亮,邱斌,于颜红. 临床肺科杂志. 2019(07)
[3]EGFR抑制剂耐药拮抗策略在非小细胞肺癌治疗中的进展[J]. 何沛敏,童欣,李冠武. 汕头大学学报(自然科学版). 2019(02)
[4]非小细胞肺癌T790M基因突变的研究进展[J]. 顾建玲,张翠英. 内蒙古医学杂志. 2019(01)
[5]肿瘤标志物在胰腺癌诊断中的研究进展[J]. 任帅,汤汇涓,王中秋. 现代肿瘤医学. 2019(03)
[6]Sanger测序与ARMS-PCR在非小细胞肺癌EGFR基因突变检测中的比较及应用评价[J]. 葛闯,易琳,唐万燕,吴明凤,杨薇,辇伟奇. 国际检验医学杂志. 2018(21)
[7]胰腺癌相关基因及分子靶向治疗的研究进展[J]. 孙宜康,张易青. 中国临床保健杂志. 2018(05)
[8]非小细胞肺癌热点靶向药物及耐药机制的研究进展[J]. 孔珊珊,吴春娇,林玉梅,李军,朱镇星. 现代肿瘤医学. 2018(21)
[9]奥希替尼治疗晚期非小细胞肺癌耐药机制研究进展[J]. 母予馨,李峻岭. 癌症进展. 2018(09)
[10]FGFR抑制剂的研究进展[J]. 谢静文,刘群鹏,郑智伟,陈潜,李物兰,吴建章,仇佩虹. 生物产业技术. 2018(05)
硕士论文
[1]血浆ctDNA检测在晚期非小细胞肺癌患者EGFR-TKI治疗中的应用研究[D]. 范军振.中国人民解放军医学院 2018
[2]分子靶向药物在非小细胞肺癌中的研究进展[D]. 贾仲飞.河北医科大学 2018
[3]FGFR1基因扩增与非小细胞肺癌的相关性研究[D]. 王雨亮.济南大学 2017
[4]癌症基因组特征性变异研究[D]. 张心愿.福州大学 2016
[5]滚环扩增快速检测HBV替诺福韦耐药突变位点研究[D]. 林钟劝.第三军医大学 2013
本文编号：3052098
【文章来源】：河北医科大学河北省
【文章页数】：117 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
数字PCR实验流程图
连接反应的温度是保证连接效率最为重要的因素之一。我们通过NEB公司的Thermostable Ligase Reaction Temperature Calculator v0.8.4在线工具(http://ligasecalc.neb.com/#!/ligation)来预测连接的最适温度。在本研究中43℃是比较理想的连接反应温度。利用荧光定量PCR对锁式探针的浓度梯度进行比较研究发现,0.1 pM是比较理想的浓度(图1)。3 MPRP方法的特异性与灵敏度
为研究MPRP反应的可行性与特异性,三组锁式突变探针被设计用来在锁式RCA反应中检测三组含有突变的模板。探针pEG858A与pEG858C分别匹配模板tEG858T与tEG858G。同样,探针pEG790G与pEG790A分别匹配模板tEG790C与tEG790T;探针pBR600A与pBR600T分别匹配模板tBR600T与tBR600A。(序列见表2)在多重定量PCR反应中使用一对通用引物与三条标记有不同荧光基团的荧光探针来实现多重检测(MPRP示意图见图3)。结果如表2所示,当锁式突变探针与突变模板完全匹配时,MPRP反应所检测到的突变模板CT值分别达到9.74±0.565、7.99±0.143和15.27±0.243(图2)。在野生模板中并未观察到CT值。这结果证明利用MPRP反应检测多重突变是可行并且特异的。
【参考文献】：
期刊论文
[1]FGFR1抑制剂PD173074经诱导自噬逆转人肺腺癌HCC827细胞对厄罗替尼耐药[J]. 刘勇世,张志培,赖远阳,李小飞,王小平,雷杰. 临床与病理杂志. 2019(11)
[2]奥希替尼治疗EGFR T790M阳性非小细胞肺癌的临床疗效[J]. 王如坤,张振亮,邱斌,于颜红. 临床肺科杂志. 2019(07)
[3]EGFR抑制剂耐药拮抗策略在非小细胞肺癌治疗中的进展[J]. 何沛敏,童欣,李冠武. 汕头大学学报(自然科学版). 2019(02)
[4]非小细胞肺癌T790M基因突变的研究进展[J]. 顾建玲,张翠英. 内蒙古医学杂志. 2019(01)
[5]肿瘤标志物在胰腺癌诊断中的研究进展[J]. 任帅,汤汇涓,王中秋. 现代肿瘤医学. 2019(03)
[6]Sanger测序与ARMS-PCR在非小细胞肺癌EGFR基因突变检测中的比较及应用评价[J]. 葛闯,易琳,唐万燕,吴明凤,杨薇,辇伟奇. 国际检验医学杂志. 2018(21)
[7]胰腺癌相关基因及分子靶向治疗的研究进展[J]. 孙宜康,张易青. 中国临床保健杂志. 2018(05)
[8]非小细胞肺癌热点靶向药物及耐药机制的研究进展[J]. 孔珊珊,吴春娇,林玉梅,李军,朱镇星. 现代肿瘤医学. 2018(21)
[9]奥希替尼治疗晚期非小细胞肺癌耐药机制研究进展[J]. 母予馨,李峻岭. 癌症进展. 2018(09)
[10]FGFR抑制剂的研究进展[J]. 谢静文,刘群鹏,郑智伟,陈潜,李物兰,吴建章,仇佩虹. 生物产业技术. 2018(05)
硕士论文
[1]血浆ctDNA检测在晚期非小细胞肺癌患者EGFR-TKI治疗中的应用研究[D]. 范军振.中国人民解放军医学院 2018
[2]分子靶向药物在非小细胞肺癌中的研究进展[D]. 贾仲飞.河北医科大学 2018
[3]FGFR1基因扩增与非小细胞肺癌的相关性研究[D]. 王雨亮.济南大学 2017
[4]癌症基因组特征性变异研究[D]. 张心愿.福州大学 2016
[5]滚环扩增快速检测HBV替诺福韦耐药突变位点研究[D]. 林钟劝.第三军医大学 2013
本文编号：3052098
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