抗CD47单克隆抗体制备及其促巨噬细胞吞噬作用鉴定

发布时间：2021-02-27 05:18

　　目的:制备可识别肿瘤细胞表达CD47蛋白的抗CD47单克隆抗体,并鉴定其抗肿瘤作用。方法:利用BL21（DE3）原核表达系统表达CD47胞外段蛋白,利用Ni-NTA层析纯化表达蛋白。免疫BALB/c小鼠,制备并筛选分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用正辛酸-硫酸铵沉淀方法纯化抗CD47单抗。利用流式细胞术检测纯化抗体的活性。利用巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验,检测抗CD47单抗的抗肿瘤作用。结果:表达并纯化了CD47胞外段蛋白,筛选到了分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株—7D4,流式细胞术检测结果显示,抗体具有结合肿瘤细胞的活性,但是对不同肿瘤类型细胞的结合效率存在差异。巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验发现,利用抗体封闭肿瘤细胞CD47信号后,可以增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。结论:抗CD47单抗—7D4可以促进巨噬细胞的吞噬作用,具有潜在应用价值。 

【文章来源】：现代肿瘤医学. 2020,28(18)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 CD47基因胞外段扩增
        1.2.2 pRSETC/CD47重组表达质粒构建
        1.2.3 CD47蛋白原核表达及纯化
        1.2.4 抗CD47单抗杂交瘤制备
        1.2.5 抗CD47单抗纯化
        1.2.6 抗CD47单抗活性检测
        1.2.7 抗CD47抗肿瘤活性鉴定
2 结果
    2.1 CD47原核表达及纯化效果鉴定
    2.2 抗CD47单抗纯化效果鉴定
    2.3 抗CD47单抗活性鉴定
    2.4 抗CD47单抗的促吞噬作用
3 讨论



本文编号：3053750