利用CRISPR/Cas9系统构建HMGA2敲除肝癌细胞系与兔模型

发布时间：2021-02-27 07:46

　　研究背景及目的:高迁移率蛋白A2（high-mobilitygroup AT-hook2,HMGA2）属于高迁移率蛋白超家族成员,是一种非组蛋白染色质结合蛋白。通过三个AT-hook区高亲和力的结合到基因组中AT富集的区域,从而改变染色质的空间构象,进而发挥基因表达调控功能。HMGA2主要在动物的胚胎期高表达,而在正常成体组织中表达量很低或几乎不表达,HMGA2突变或缺失的动物表现出严重的胎儿发育阻滞以及明显的侏儒表型,表明HMGA2主要与动物的胚胎发育有关,参与动物的生长发育调节;此外,研究发现在大部分肿瘤细胞中HMGA2也相对于癌旁组织高表达,而且参与了肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等致瘤过程,还与患者的预后不良有关,表明HMGA2也是一个重要的致癌因子。综合以上信息,本课题首先探究了 HMGA2在肝癌细胞系HepG2中的作用,检测HMGA2的失活对于肝癌细胞相关代谢、生长、增殖的影响;其次,以兔为模式动物,期望采用CRISPR/Cas9系统敲除HMGA2基因制备侏儒兔模型,为实验动物微型化以及侏儒症研究提供一种模型动物。研究方法:（1）在人的HMGA2基因第一外显子和第二外显子处各设... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ＨＭＧＡ２在不同组织样本中的表达??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＭＧＡ２?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｕｍｏｒ?ｔｉｓｓｕｅｓ??

?颂士学位论文???２．４．２?ｓｇＲＮＡ?设计??采用在线ｓｇＲＮＡ设计软件，在人ＨＭＧＡ２基因的第一外显子与第二外显子处各设计??一对ｓｇＲＮＡ，分别命名为ｓｇＥｌ和ｓｇＥ２?（如图２－２）。为了便于与Ｂｂｓｌ酶切的ＰＸ４５８载体??连接，需在ｓｇＲＮＡ正义链的５＇端添加ＣＡＣＣ接头，反义链的３端添加ＡＡＡＣ接头。此外，??由于ｓｇＥ２的５端不是以Ｇ开头，为了提高Ｕ６启动子的活性，需在ｓｇＥ２的５＇端额外添加一??个Ｇ。最终得到的ｓｇＲＮＡ?ｏｌｉｇｏ序列如表２－１所示。??ＡＣＡＡＴＴＡＧＧＡＡＣＣＡＡＣＣＧＧＴＧＡＧＣＣＣＴＣＴＣＣＴＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＧＧＧＧＡ??ＴＧＴＴＡＡＴＣＣＴＴＧＧｒＴＧＧＣＣＡＣＴＣＧＧＧＡＧＡＧＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＣＣＣＣＴ??—??ＰＡＭ?ｓｂＥ２???????Ｅｌ?Ｅ２?Ｅ３?Ｅ４?Ｅ５??＿?ｔ?—?：．６ｋｂ?＿??＾ＣＡＡＣＣＴＧＣＣＧＣＣＣＣＡＧＣＧＣＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＣＣＣＡＧＧ??ＧＴＴＧＧＡＣＧＧＣＧＧＧＧＴＣＧＣＧＧＡＧＴＣＴＴＣＴＣＴＣＣＴＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＧＧＴＣＣ??ＰＡＭ??图２－２?ｓｇＲＮＡ位点??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｔｈｅ?ｌｏｃｕｓ?ｏｆ?ｓｇＲＮＡ??表２－１?ｓｇＲＮＡ?ｏｌｉｇｏ序列??Ｔａｂｌｅ?２－１１＇ｈｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ｓｇＲＮＡ?ｏｌｉｇｏ??序列名称?序列（５＇—３＇）??Ｎａｍｅ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?（５’—３＇）??ｓｇＥｌ－Ｔ?ＣＡＣＣＧＴＣＣＴＣＴＣＴＴＣＴＧＡＧＧＣＧＣＴ??ｓｇＥｌ－Ｂ?ＡＡＡＣＡＧＣＧＣＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＡ

图２－３?ＰＸ４５８酶切结果（Ｍ：?ＤＬ１５０００ｍａｒｋｅｒ，?Ｌｉｎｅｌ：ＰＸ４５８，Ｌｉｎｅ２：ＰＸ４５８酶切）??

【参考文献】：
期刊论文
[1]高迁移率族蛋白A2与原发性肝细胞癌患者临床病理特征及其预后的关系[J]. 杨晋,夏先明,贺凯,张孟瑜,冯春红,秦蜀.  中国现代医学杂志. 2019(24)
[2]PCOS易感基因Hmga2在小鼠子宫蜕膜化中的表达与调节[J]. 曹永芝,赵跃然,林德贵.  中国实验动物学报. 2017(05)



本文编号：3053919