黄酮调控乳腺癌细胞内NO和ROS水平影响DLC1/RhoA信号通路的研究
发布时间：2021-03-02 14:23
RhoGTP酶家族是肌动蛋白骨架的关键调控因子,是一类GTP/GDP分子开关蛋白,结合GTP时为活化状态,结合GDP时为失活状态。RhoA是RhoGTP酶家族最具典型特征的成员之一。肿瘤抑制蛋白DLC1（Deleted in Liver Cancer 1）是RhoGAP（RhoGTPase-activating protein）家族成员之一,催化其下游靶蛋白RhoA从RhoA-GTP状态转变为RhoA-GDP状态,使RhoA失活。DLC1蛋白在细胞内不稳定,在多种癌症中低表达或缺失。一氧化氮（NO）和活性氧（ROS）在细胞内发挥信号分子的功能,参与调控多种细胞信号转导途径。NO由一氧化氮合酶（NOS）合成,在细胞内通过诱导蛋白质亚硝基化（S-nitrosylation）调控一系列细胞生理进程。亚硝基化是一种可逆的蛋白质翻译后修饰,通过一个NO基团与半胱氨酸残基上的反应性的硫醇基团结合,形成亚硝基硫醇（S-nitrosothiol）。有报道指出NO影响RhoA的活力。ROS调控成纤维细胞RhoA活力,该过程不依赖于RhoGEF或RhoGAP。ROS调控RhoGAP家族成员p190Rho-...
【文章来源】：山东师范大学山东省
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RhoGTPases下游靶分子[3]
位于DLC1的SAM结构域和RhoGAP结构域之间的富含丝氨酸的中间区域，是 DLC 家族保守程度最低的区域，该区域功能复杂[33-34, 38]。DLC1 通过其中间区域与粘着斑上的 tensin 的 SH2 结构域（SH2 domain）和 PTB 结构域（phosphotyrosine-binding domin）相互作用，影响癌细胞迁移[39-40]。DLC1 与整合素β3（integrin β3）相互竞争，与 tensin1 的 PTB 结构域结合。DLC1 分子上的442 酪氨酸位点对于 DLC1 与 tensin 的相互作用至关重要，酪氨酸 442 位点的点突变导致 DLC1 不能与 tensin 的 SH2 结构域结合，影响 DLC1 的功能[40]。DLC1中间区域上存在一个与桩蛋白（paxillin）LD 基序（LD motifs）同源的 LD 样基序（LD-like motifs），该 LD 样基序包含 8 个氨基酸残基（469LDDILYHV476），对于 DLC1 与踝蛋白（talin）和粘着斑激酶（FAK）的结合是必须的。LD 样基序的突变导致 DLC1 不能与 talin 和 FAK 结合，影响 DLC1 在粘着斑的定位，并导致 DLC1 的肿瘤抑制功能受损[41]。
经显著性差异分析，150、200和 250μM 黄酮处理 MDA-MB-231 细胞 72 小时显著抑制细胞增殖（P<0.05）（图2-1D）。上述实验数据说明，黄酮以剂量和时间依赖性的方式抑制乳腺癌细胞增殖。4.2 黄酮诱导乳腺癌细胞凋亡本研究通过 Hoechst 33342-PI 核荧光染色法检测细胞凋亡和坏死。当细胞凋亡时，染色质发生固缩。Hoechst 33342 发蓝色荧光，能穿过细胞膜。Hoechst 33342染色后，凋亡细胞的蓝色荧光强度高于正常细胞。PI（碘化丙啶）发红色荧光，不能穿过细胞膜，所以不能染色正常细胞和凋亡细胞。而当细胞坏死时，细胞膜丧失完整性，因此，PI 可以染色坏死细胞，发亮红色荧光。Hoechst 33342-PI 核荧光染色后，正常细胞呈弱蓝色荧光，凋亡细胞呈强蓝色荧光，坏死细胞呈强蓝色荧光和强红色荧光。统计凋亡细胞时，应统计呈强蓝色荧光的细胞数减去同时呈强蓝色荧光和强红色荧光的细胞数。浓度为的 200μM 黄酮分别处理乳腺癌 MCF-7 细胞 24、48 和 72 小时
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄酮类化合物的抗癌作用及作用机制[J]. 朱文振,马龙,李国荣. 生命科学. 2012(05)
[2]Anti-cancer effect of iNOS inhibitor and its correlation with angiogenesis in gastric cancer[J]. Guang-Yi Wang, Bai Ji, Xu Wang, Jian-Hua Gu, Department of General Surgery, the First Hospital, Jilin University, Changchun 130021, Jilin Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(25)
本文编号：3059418
【文章来源】：山东师范大学山东省
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RhoGTPases下游靶分子[3]
位于DLC1的SAM结构域和RhoGAP结构域之间的富含丝氨酸的中间区域，是 DLC 家族保守程度最低的区域，该区域功能复杂[33-34, 38]。DLC1 通过其中间区域与粘着斑上的 tensin 的 SH2 结构域（SH2 domain）和 PTB 结构域（phosphotyrosine-binding domin）相互作用，影响癌细胞迁移[39-40]。DLC1 与整合素β3（integrin β3）相互竞争，与 tensin1 的 PTB 结构域结合。DLC1 分子上的442 酪氨酸位点对于 DLC1 与 tensin 的相互作用至关重要，酪氨酸 442 位点的点突变导致 DLC1 不能与 tensin 的 SH2 结构域结合，影响 DLC1 的功能[40]。DLC1中间区域上存在一个与桩蛋白（paxillin）LD 基序（LD motifs）同源的 LD 样基序（LD-like motifs），该 LD 样基序包含 8 个氨基酸残基（469LDDILYHV476），对于 DLC1 与踝蛋白（talin）和粘着斑激酶（FAK）的结合是必须的。LD 样基序的突变导致 DLC1 不能与 talin 和 FAK 结合，影响 DLC1 在粘着斑的定位，并导致 DLC1 的肿瘤抑制功能受损[41]。
经显著性差异分析，150、200和 250μM 黄酮处理 MDA-MB-231 细胞 72 小时显著抑制细胞增殖（P<0.05）（图2-1D）。上述实验数据说明，黄酮以剂量和时间依赖性的方式抑制乳腺癌细胞增殖。4.2 黄酮诱导乳腺癌细胞凋亡本研究通过 Hoechst 33342-PI 核荧光染色法检测细胞凋亡和坏死。当细胞凋亡时，染色质发生固缩。Hoechst 33342 发蓝色荧光，能穿过细胞膜。Hoechst 33342染色后，凋亡细胞的蓝色荧光强度高于正常细胞。PI（碘化丙啶）发红色荧光，不能穿过细胞膜，所以不能染色正常细胞和凋亡细胞。而当细胞坏死时，细胞膜丧失完整性，因此，PI 可以染色坏死细胞，发亮红色荧光。Hoechst 33342-PI 核荧光染色后，正常细胞呈弱蓝色荧光，凋亡细胞呈强蓝色荧光，坏死细胞呈强蓝色荧光和强红色荧光。统计凋亡细胞时，应统计呈强蓝色荧光的细胞数减去同时呈强蓝色荧光和强红色荧光的细胞数。浓度为的 200μM 黄酮分别处理乳腺癌 MCF-7 细胞 24、48 和 72 小时
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄酮类化合物的抗癌作用及作用机制[J]. 朱文振,马龙,李国荣. 生命科学. 2012(05)
[2]Anti-cancer effect of iNOS inhibitor and its correlation with angiogenesis in gastric cancer[J]. Guang-Yi Wang, Bai Ji, Xu Wang, Jian-Hua Gu, Department of General Surgery, the First Hospital, Jilin University, Changchun 130021, Jilin Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(25)
本文编号：3059418
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