PRSS3调控肺癌增殖与转移过程的作用及机制研究

发布时间：2021-03-03 17:03

　　第一部分:PRSS3-SPINKs-KLK5通路在肺腺癌增殖与转移过程中的作用及机制探讨目的:通过临床、细胞生物学及生物信息学等相关研究方法探索PRSS3基因在肺腺癌增殖与侵袭转移过程中的作用及机制。方法:我们采用生物信息学方法采集分析了多个基因芯片数据库中肺腺癌PRSS3的表达水平,并分析了其与预后的关系。通过慢病毒shRNA感染技术敲低了肺腺癌细胞A549、HCC827及PC9中PRSS3基因的表达,并观察对其增殖、侵袭迁移能力的影响;为明确PRSS3作用的下游信号通路,我们在PRSS3敲低的PC9细胞中收集无血清培养液,浓缩后Western Blot分析了浓缩培养液中SPINKs、KLK5及其下游蛋白的表达情况,并通过免疫共沉淀（Co-IP）分析在培养液中是否存在SPINKs与KLK5的结合。最后我们设计小鼠动物模型验证PRSS3在肺腺癌发生发展中的作用,并探究Mesotrypsin（PRSS3的编码蛋白）抑制剂对肺腺癌PC9细胞系增殖、迁移的影响。结果:Oncomine数据库综合分析结果显示PRSS3的表达水平在肺腺癌中较正常肺肺组织中更高;同时K-Mplotter数据库分析发... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

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前言
第一部分 PRSS3-SPINKs-KLK5通路在肺腺癌增殖与转移过程中的作用及机制探讨
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 细胞株
        2.2 实验试剂与仪器材料
        2.3 实验方法
        2.4 动物实验
        2.5 统计方法
    3 结果
        3.1 PRSS3在肺腺癌和正常组织中表达及对预后的影响
        3.2 PRSS3在肺腺癌细胞系中的表达及细胞系筛选
        3.3 PRSS3基因沉默对三种肺腺癌细胞系表型的影响
        3.4 Mesotrypsin抑制剂对PC9肺腺癌细胞增殖及侵袭迁移的影响
        3.5 PRSS3影响肺腺癌细胞系PC9表型的下游信号通路研究
        3.6 活性Mesotrypsin作用对PC9细胞培养液中KLK5活性的影响
        3.7 KLK5引起PC9细胞表型变化的下游效应分子
        3.8 小鼠原位注射PRSS3敲低的肺腺癌PC9细胞动物模型验证
    4 讨论
    5 结论
    6 参考文献
第二部分 PRSS3在肺鳞癌增殖与转移过程中作用的初步探索
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 细胞株
        2.2 实验试剂与仪器材料
        2.3 实验方法
        2.4 统计方法
    3 结果
        3.1 PRSS3在肺鳞癌和正常组织中的表达比较
        3.2 PRSS3表达水平与肺鳞癌患者预后的关系
        3.3 筛选PRSS3高表达的肺鳞癌细胞系
        3.4 PRSS3基因沉默可降低对肺鳞癌侵袭迁移能力的影响
        3.5 PRSS3及KLK5基因沉默对SNAIL1及AKT/p-AKT水平的影响
    4 讨论
    5 绪论
    6 参考文献
全文总结
综述
    参考文献
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]人丝氨酸蛋白酶抑制因子抗肿瘤作用的研究进展[J]. 王雪蕾,伦永志.  生物技术通讯. 2014(04)
[2]蜱源含Kunitz功能域的丝氨酸蛋白酶抑制分子研究进展[J]. 乔瑞琼,周金林.  动物医学进展. 2013(11)
[3]人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子抗肿瘤作用研究进展[J]. 冯洁,伦永志.  大连大学学报. 2012(03)
[4]肺癌靶向治疗的研究进展[J]. 张晓君,强玲,宋丽华.  中华肿瘤防治杂志. 2010(07)
[5]丝氨酸蛋白酶研究进展[J]. 汪世华,王文勇,黄益洲,林琳,沙莉.  福建农业学报. 2007(04)
[6]Kazal型蛋白酶抑制剂结构与功能研究进展[J]. 郑青亮,盛清,张耀洲.  生物工程学报. 2006(05)
[7]补体系统丝氨酸蛋白酶的结构与功能[J]. 何智,陈政良.  国外医学(免疫学分册). 2004(06)
[8]Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构与功能研究[J]. 袁春华,梁宋平.  生命科学研究. 2003(02)
[9]基于结构的丝氨酸蛋白酶超家族进化分析[J]. 季星来,孙之荣.  电子学报. 2001(S1)
[10]丝氨酸蛋白酶超家族分子结构进化研究[J]. 孙之荣,王钰,胡胜民,郭青,贺福初.  生物物理学报. 1999(03)

博士论文
[1]克氏原螯虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子基因克隆、表达及功能分析[D]. 李新苍.山东大学 2010



本文编号：3061610