SLPI促黑色素瘤A375细胞迁移的机制研究
发布时间：2021-03-06 08:06
实验背景:黑色素瘤作为目前发展最快、预后最为不良的恶性肿瘤之一,现已引起越来越广泛的关注。侵袭和转移是黑色素瘤最显著的特征及影响患者生存的首要因素,也是其治疗困难的一个重要原因。肿瘤的局部扩散和转移是很多癌症致死的主要原因,肿瘤的浸润和转移是一个多步骤、多因素综合作用的复杂过程,涉及到多种黏附分子、基质蛋白酶、细胞因子及相应的信号转导机制和相关的基因改变,其转移机制的研究是目前的难点和热点。最近的研究表明,分泌性白细胞蛋白酶抑制剂（secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI）既是炎症抑制剂也是蛋白酶抑制剂,通过降解周边组织参与肿瘤的发生与代谢。研究表明SLPI的表达水平与肿瘤迁移入侵能力呈正相关,迄今为止,SLPI如何增强肿瘤迁移的恶性表型暂不清楚。本课题以黑色素瘤A375细胞作为研究对象,通过RT-PCR、Western Blot、明胶酶谱实验及Transwell细胞迁移实验验证SLPI促进A375细胞迁移的分子机制。实验结果:1.RT-PCR结果显示在A375 SLPI（+）细胞中MMP-2 m RNA水平没有明显变化,但是MMP-9 m...
【文章来源】：昆明理工大学云南省
【文章页数】：103 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
预设信号通路Fig1.1Theproposedpathway
昆明理工大学研究生毕业2. 通过慢病毒包装体系将质粒包装成慢病毒，并感染 A375 细胞，由于 A细胞本身 SLPI 表达水平很低，因此在 SLPI 过表达的基础上加入 SLP扰的慢病毒，降低 SLPI 的表达；3. 通过流式细胞仪分选出感染成功的阳性细胞系，培养稳转细胞系；4. 通过 RT-PCR 实验验证细胞系；5. 通过 Western Blot 实验验证不同细胞系中相关蛋白表达量差异；6. 通过明胶酶谱实验确定基质金属蛋白酶 2/9(MMP-2/9)的表达量；7. 通过 Transwell 细胞迁移实验验证 SLPI 对 A375 细胞迁移的影响。
昆明理工大学研究生毕业论文7. 氨苄青霉素溶液配制(Amp, 50mg/ml)称取 5gAmpicillin 置于 100ml 离心管中，加入 80ml 超纯水充分溶解后定容至 100ml，0.22μm 滤膜过滤除菌，小份分装后置于-20℃保存。使用时，按 1:1000比例稀释后使用，其工作浓度为 50μg/ml。2.2 SLPI 基因过表达体系的构建2.2.1 引物设计根据 NCBI 中人源 SLPI 编码序列(NCBI Reference Sequence: NG_028137.1)及 pLVX-IRES-ZsGreen1 载体多克隆位点读码框(见图 2.1)，设计引物扩增 SLPI基因序列，引物两端的酶切位点分别为 EcoRⅠ/XhoⅠ(表 2.1)。引物委托昆明硕擎生物科技有限公司合成。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mnk kinase pathway: Cellular functions and biological outcomes[J]. Sonali Joshi,Leonidas C Platanias. World Journal of Biological Chemistry. 2014(03)
[2]现代医学对恶性肿瘤转移相关机制的研究进展[J]. 陈惠,渠景连,龚婕宁. 中国中药杂志. 2014(15)
博士论文
[1]Mnk2作为非小细胞肺癌的预后因子及其分子基础[D]. 彭桂林.南方医科大学 2016
[2]CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭和转移影响的实验研究[D]. 吴包金.第二军医大学 2009
硕士论文
[1]青藤碱靶向巨噬细胞α7nAChR的抗炎机制的研究[D]. 朱瑞丽.广州中医药大学 2016
本文编号：3066734
【文章来源】：昆明理工大学云南省
【文章页数】：103 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
预设信号通路Fig1.1Theproposedpathway
昆明理工大学研究生毕业2. 通过慢病毒包装体系将质粒包装成慢病毒，并感染 A375 细胞，由于 A细胞本身 SLPI 表达水平很低，因此在 SLPI 过表达的基础上加入 SLP扰的慢病毒，降低 SLPI 的表达；3. 通过流式细胞仪分选出感染成功的阳性细胞系，培养稳转细胞系；4. 通过 RT-PCR 实验验证细胞系；5. 通过 Western Blot 实验验证不同细胞系中相关蛋白表达量差异；6. 通过明胶酶谱实验确定基质金属蛋白酶 2/9(MMP-2/9)的表达量；7. 通过 Transwell 细胞迁移实验验证 SLPI 对 A375 细胞迁移的影响。
昆明理工大学研究生毕业论文7. 氨苄青霉素溶液配制(Amp, 50mg/ml)称取 5gAmpicillin 置于 100ml 离心管中，加入 80ml 超纯水充分溶解后定容至 100ml，0.22μm 滤膜过滤除菌，小份分装后置于-20℃保存。使用时，按 1:1000比例稀释后使用，其工作浓度为 50μg/ml。2.2 SLPI 基因过表达体系的构建2.2.1 引物设计根据 NCBI 中人源 SLPI 编码序列(NCBI Reference Sequence: NG_028137.1)及 pLVX-IRES-ZsGreen1 载体多克隆位点读码框(见图 2.1)，设计引物扩增 SLPI基因序列，引物两端的酶切位点分别为 EcoRⅠ/XhoⅠ(表 2.1)。引物委托昆明硕擎生物科技有限公司合成。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mnk kinase pathway: Cellular functions and biological outcomes[J]. Sonali Joshi,Leonidas C Platanias. World Journal of Biological Chemistry. 2014(03)
[2]现代医学对恶性肿瘤转移相关机制的研究进展[J]. 陈惠,渠景连,龚婕宁. 中国中药杂志. 2014(15)
博士论文
[1]Mnk2作为非小细胞肺癌的预后因子及其分子基础[D]. 彭桂林.南方医科大学 2016
[2]CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭和转移影响的实验研究[D]. 吴包金.第二军医大学 2009
硕士论文
[1]青藤碱靶向巨噬细胞α7nAChR的抗炎机制的研究[D]. 朱瑞丽.广州中医药大学 2016
本文编号：3066734
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