基于银纳米簇荧光探针结合双链特异性核酸酶扩增检测miRNA
发布时间：2021-03-20 10:54
MicroRNA（miRNA）是在真核细胞中发现的一种非编码的小分子RNA,平均有22个核糖核苷酸组成。MiRNA通过控制细胞内蛋白质的翻译,来调节植物、动物和人类的基因表达。而且,有研究表明,miRNA的异常表达通常与癌症的发生,肿瘤的形成有关。因而,检测组织或细胞中miRNA的表达水平可为生物医学研究和临床早期诊断提供有价值的信息。然而,miRNA序列短稳定性差,家族序列同源性高、在细胞内表达水平较低且对体外研究环境的要求也十分苛刻。因此,建立简单、灵敏的miRNA检测方法对miRNA研究,以及癌症或肿瘤的早期诊断具有重要意义。相比传统的有机荧光染料和半导体量子点等纳米荧光材料,金属纳米簇具有不易光漂白、生物兼容性好、发光波长及团簇尺寸可调、合成条件温和等优点。本论文中,我们合成了一种暗的DNA-银纳米簇。暗DNA-银纳米簇合成后荧光处于熄灭状态,荧光强度很低;当有富G序列靠近AgNCs时,可以激发暗DNA-AgNCs的荧光。利用暗银簇的这个特性,结合双链特异性核酸酶诱导的扩增（DSNSA）反应,我们建立了系列简单、快速检测miRNA的方法。（1）基于DNA-银纳米簇结合双链特异性...
【文章来源】：河北大学河北省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Northernblotting印迹技术示意图
河北大学硕士学位论文4素信号，得到了小鼠脑组织中44种miRNA的表达谱。在2004年，Ruan[23]等人将从细胞或组织中提取的RNA用荧光染料进行标记，随后与固定在载玻片上的微阵列核酸探针杂交，通过检测荧光信号的强度来判断样品中所含RNA的量，实验原理如图1-2所示。该方法用荧光染料直接标记RNA减少了放射元素对分析人员及环境的伤害，而且可以通过测量荧光强度的大小就可对RNA定量，大大简化了实验过程。图1-2微阵列芯片荧光标记法检测miRNA流程图Ruan[24]等人利用荧光量子点(QDs)和金纳米粒子建立了两种灵敏检测miRNA的方法。方法原理如图1-3所示。首先，他们将标记Biotin的miRNA与固定在刚性载玻片上的捕获探针杂交，将未杂交的miRNA洗去。然后，加入有STV修饰的量子点，基于Biotin与STV的特异性作用，QDs就结合到了有Biotin标记的目标miRNA上。因QDs具备较高的消光系数和荧光量子产率，可以直接用激光共聚焦扫描仪很容易检测到微量的miRNA。该方法可以检测到0.4fmol的miRNA。另外一种是利用金纳米粒子-银比色法检测miRNA。首先，将标有Biotin的miRNA与固定在刚性载玻片上的捕获探针杂交，然后，加入标记有STV的金纳米粒子，基于Biotin与STV的特异性作用，金纳米离子就结合到了有Biotin标记的目标miRNA上，加入含有Ag+的溶液，金纳米粒子催化Ag+还原为Ag微粒沉积在金纳米粒子的表面，利用Ag微粒的显色作用目视比色法即可实现对miRNA的检测。
第1章引言5图1-3利用荧光量子点(QDs)和金纳米粒子灵敏检测miRNA的方法原理图2007年，J.Shingara[25]等在miRNA的3"-端由聚合酶引入poly(U)的长链，其中包含氨基修饰的UTP，Cy3或Cy5荧光染料键合到氨基修饰的UTP上，使在一个miRNA分子中能够标记上多个荧光染料。随后，miRNA与固定在载玻片上的捕获探针阵列杂交。该方法可检测到0.14fmol的miRNA。实验原理如图1-4所示，图1-4在miRNA分子上标记多个荧光分子高灵敏检测miRNA的实验原理图微阵列芯片技术与Northernblotting印迹法相比，虽可以实现对miRNA的高通量检测，检测灵敏度有所提高，但仍存在稳定性差，实验成本高，标记过程复杂等缺点。使其在对miRNA的检测方面也受到了限制。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA的检测方法概述[J]. 李万琴,贺荣芳,甘润良. 临床与病理杂志. 2015(07)
[2]贵金属纳米簇的独特性能及其制备方法[J]. 易丽丽,国海光,唐浩东. 工业催化. 2003(12)
[3]核酸与人体健康[J]. 贾秀玲. 山西食品工业. 2000(01)
硕士论文
[1]DNA-Ag纳米簇的合成及生物传感研究[D]. 马坤.浙江师范大学 2012
本文编号：3090882
【文章来源】：河北大学河北省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Northernblotting印迹技术示意图
河北大学硕士学位论文4素信号，得到了小鼠脑组织中44种miRNA的表达谱。在2004年，Ruan[23]等人将从细胞或组织中提取的RNA用荧光染料进行标记，随后与固定在载玻片上的微阵列核酸探针杂交，通过检测荧光信号的强度来判断样品中所含RNA的量，实验原理如图1-2所示。该方法用荧光染料直接标记RNA减少了放射元素对分析人员及环境的伤害，而且可以通过测量荧光强度的大小就可对RNA定量，大大简化了实验过程。图1-2微阵列芯片荧光标记法检测miRNA流程图Ruan[24]等人利用荧光量子点(QDs)和金纳米粒子建立了两种灵敏检测miRNA的方法。方法原理如图1-3所示。首先，他们将标记Biotin的miRNA与固定在刚性载玻片上的捕获探针杂交，将未杂交的miRNA洗去。然后，加入有STV修饰的量子点，基于Biotin与STV的特异性作用，QDs就结合到了有Biotin标记的目标miRNA上。因QDs具备较高的消光系数和荧光量子产率，可以直接用激光共聚焦扫描仪很容易检测到微量的miRNA。该方法可以检测到0.4fmol的miRNA。另外一种是利用金纳米粒子-银比色法检测miRNA。首先，将标有Biotin的miRNA与固定在刚性载玻片上的捕获探针杂交，然后，加入标记有STV的金纳米粒子，基于Biotin与STV的特异性作用，金纳米离子就结合到了有Biotin标记的目标miRNA上，加入含有Ag+的溶液，金纳米粒子催化Ag+还原为Ag微粒沉积在金纳米粒子的表面，利用Ag微粒的显色作用目视比色法即可实现对miRNA的检测。
第1章引言5图1-3利用荧光量子点(QDs)和金纳米粒子灵敏检测miRNA的方法原理图2007年，J.Shingara[25]等在miRNA的3"-端由聚合酶引入poly(U)的长链，其中包含氨基修饰的UTP，Cy3或Cy5荧光染料键合到氨基修饰的UTP上，使在一个miRNA分子中能够标记上多个荧光染料。随后，miRNA与固定在载玻片上的捕获探针阵列杂交。该方法可检测到0.14fmol的miRNA。实验原理如图1-4所示，图1-4在miRNA分子上标记多个荧光分子高灵敏检测miRNA的实验原理图微阵列芯片技术与Northernblotting印迹法相比，虽可以实现对miRNA的高通量检测，检测灵敏度有所提高，但仍存在稳定性差，实验成本高，标记过程复杂等缺点。使其在对miRNA的检测方面也受到了限制。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA的检测方法概述[J]. 李万琴,贺荣芳,甘润良. 临床与病理杂志. 2015(07)
[2]贵金属纳米簇的独特性能及其制备方法[J]. 易丽丽,国海光,唐浩东. 工业催化. 2003(12)
[3]核酸与人体健康[J]. 贾秀玲. 山西食品工业. 2000(01)
硕士论文
[1]DNA-Ag纳米簇的合成及生物传感研究[D]. 马坤.浙江师范大学 2012
本文编号：3090882
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