采用噬菌体展示技术体外筛选人乳腺癌细胞特异性结合肽
发布时间：2021-03-22 18:42
目的:利用噬菌体展示技术体外筛选方法获得人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽,并进行初步鉴定,为乳腺癌的早期诊断及治疗提供理论基础。方法:我们体外培养人乳腺髓样癌Bcap-37细胞作为靶细胞,人正常乳腺上皮细胞MCF-10A为吸附细胞,利用噬菌体展示技术,将噬菌体展示随机七肽库与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞进行减性体外筛选,从而获得可与人乳腺癌细胞特异性结合的含有外源性多肽的单克隆噬菌体。通过四轮体外减性筛选后,随机挑选20个生长良好的单克隆噬菌体,进行扩增纯化。运用ELISA法鉴定噬菌体对人乳腺癌Bcap-37细胞的亲和力。提取亲和力较高的单克隆噬菌体DNA,进行序列测定,并推导出与乳腺癌结合的外源性多肽的氨基酸序列,再进行同源性分析。采用固相合成法合成多肽及其相应的对照肽。MTT法检测合成肽及对照肽对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖情况的影响。通过细胞损伤修复实验,研究靶向肽对人乳腺癌Bcap-37细胞迁移能力的影响。结果:1.体外成功培养生长良好的人乳腺髓样癌Bcap-37细胞及人正常乳腺上皮MCF-10A细胞。2.通过四轮体外筛选后,噬菌体在人乳腺髓样癌Bca...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人乳腺癌Bcap-37细胞（×200）
山西医科大学硕士学位论文2 结 果2.1 细胞的体外培养人乳腺髓样癌 Bcap-37 细胞及人正常乳腺上皮细胞 MCF-10A 体外培养。在倒置显微镜下观察细胞：人乳腺髓样癌 Bcap-37 细胞呈单层贴壁生长，细胞膜完整，胞浆饱满，细胞的形态呈梭形或不规则形；人正常乳腺上皮 MCF-10A 细胞亦呈单层贴壁生长，细胞膜完整，胞浆饱满，细胞形态多呈不规则多边形（见图 2-1,2-2）
图 2-3：第一轮筛选后滴度测定结果 图 2-4：第四轮筛选后滴度测定结果表 2-1 四轮减性筛选后阳性噬菌体克隆的富集结果Round of screening Input phage(pfu) Output phage(pfu) Yield1 2×10114.0×1042.0×10-72 2×10111.8×1069.0×10-6342×10112×10111.4×1073.2×1077.0×10-51.6×10-42.3 ELISA 法鉴定阳性噬菌体克隆与乳腺癌细胞的亲和力经过 4 轮体外减性筛选后，铺制 LB/IPTG/X-gal 平板（同噬菌体滴度测定），20个生长良好的单克隆噬菌体蓝斑被随机挑取，利用 ELISA 法鉴定单克隆噬菌体对人乳腺癌 Bcap-37 细胞的亲和力，测出每孔 OD450nm值。结果显示：1、3、5、6、8、12、
本文编号：3094295
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人乳腺癌Bcap-37细胞（×200）
山西医科大学硕士学位论文2 结 果2.1 细胞的体外培养人乳腺髓样癌 Bcap-37 细胞及人正常乳腺上皮细胞 MCF-10A 体外培养。在倒置显微镜下观察细胞：人乳腺髓样癌 Bcap-37 细胞呈单层贴壁生长，细胞膜完整，胞浆饱满，细胞的形态呈梭形或不规则形；人正常乳腺上皮 MCF-10A 细胞亦呈单层贴壁生长，细胞膜完整，胞浆饱满，细胞形态多呈不规则多边形（见图 2-1,2-2）
图 2-3：第一轮筛选后滴度测定结果 图 2-4：第四轮筛选后滴度测定结果表 2-1 四轮减性筛选后阳性噬菌体克隆的富集结果Round of screening Input phage(pfu) Output phage(pfu) Yield1 2×10114.0×1042.0×10-72 2×10111.8×1069.0×10-6342×10112×10111.4×1073.2×1077.0×10-51.6×10-42.3 ELISA 法鉴定阳性噬菌体克隆与乳腺癌细胞的亲和力经过 4 轮体外减性筛选后，铺制 LB/IPTG/X-gal 平板（同噬菌体滴度测定），20个生长良好的单克隆噬菌体蓝斑被随机挑取，利用 ELISA 法鉴定单克隆噬菌体对人乳腺癌 Bcap-37 细胞的亲和力，测出每孔 OD450nm值。结果显示：1、3、5、6、8、12、
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