MKL-1/miR-142-5p/DNMT1/maspin信号通路调控乳腺癌细胞迁移和增殖

发布时间：2021-04-02 19:23

　　目的:乳腺癌是导致女性癌症患者死亡的第二大主要原因,它的发生和进展与多种信号通路和转录因子相关。有报道指出抑癌基因的甲基化和microRNA（miRNA）的异常表达参与了肿瘤的发生与发展,其中DNMT1作为甲基转移酶在包括乳腺癌在内的数种肿瘤中表达水平升高,miR-142-5p作为miRNA成员在多种肿瘤中表达失常。DNMT1在乳腺肿瘤的发生发展中起到了什么作用?miR-142-5p与DNMT1是如何相互作用,影响乳腺癌细胞的增殖和迁移的?本研究将从与乳腺癌迁移和增殖相关的信号通路和转录因子进行探讨,阐明乳腺癌发生发展机制,为寻找新的生物标志物和治疗靶点提供新方向。本文围绕MKL-1/miR-142/DNMT1/maspin信号通路调控乳腺癌细胞的迁移和增殖展开研究。方法:用分子生物学方法构建MKL-1的表达质粒pcDNA3.1-MKL-1,以及荧光素酶报告基因质粒pGL-3-miR-142-5p-WT-LUC、pGL-3-miR-142-5p-MUT-LUC、pmirGLO-DNMT1-WT-3′UTR-LUC和pmirGLO-DNMT1-MUT-3′UTR-LUC。在乳腺癌细胞中敲... 

【文章来源】：武汉科技大学湖北省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞系、菌种、动物
        2.1.2 引物
    2.2 试剂
        2.2.1 质粒构建及提取相关试剂
        2.2.2 Western Blot相关试剂
        2.2.3 RNA提取及实时荧光定量PCR相关试剂
        2.2.4 细胞培养相关试剂
        2.2.5 转染相关试剂
    2.3 实验仪器和设备
    2.4 实验方法
        2.4.1 细胞培养
        2.4.2 质粒提取与转染
        2.4.3 转染方法
        2.4.4 荧光素酶报告分析
        2.4.5 Western Bloting
        2.4.6 划痕实验
        2.4.7 细胞迁移实验（Transwell）
        2.4.8 RNA提取及反转录、实时荧光定量PCR
        2.4.9 免疫荧光
        2.4.10 EdU细胞增殖实验
        2.4.11 CCK-8细胞增殖实验
        2.4.12 慢病毒包装转染
        2.4.13 动物成瘤实验
        2.4.14 免疫组化（IHC）
第3章 实验结果
    3.1 DNMT1抑制maspin表达,调节乳腺癌细胞增殖迁移能力
    3.2 MKL-1影响DNMT1和maspin的表达
    3.3 MiR-142-5p抑制乳腺癌细胞的迁移和增殖并调节细胞周期
    3.4 MiR-142-5p靶向3’UTR抑制DNMT1 表达,并上调maspin
    3.5 MKL-1能够促进miR-142-5p转录
    3.6 MiR-142-5p抑制体内乳腺癌细胞的肿瘤生长
第4章 讨论与展望
第5章 结论
致谢
参考文献
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文
附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目



本文编号：3115816