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LAMP2在舌鳞癌细胞顺铂耐药中的作用及机制研究

发布时间:2021-04-10 16:34
  [目的]顺铂是晚期舌鳞癌常用的化疗药物,但耐药性是影响舌鳞癌患者预后的主要因素,然而,舌鳞癌顺铂耐药的潜在机制尚未完全阐明。本课题拟研究LAMP2在舌鳞癌细胞顺铂耐药中的作用及机制,为临床舌鳞癌治疗提供新的策略。[方法]通过小剂量顺铂反复诱导建立舌鳞癌顺铂耐药株;Western blot检测顺铂处理舌鳞癌细胞后自噬相关蛋白的表达水平;MTT实验检测氯喹作用耐药细胞株后的增殖活性改变;siRNA方法敲低舌鳞癌细胞LAMP2的表达,MTT实验以及AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测敲低LAMP2后舌鳞癌细胞增殖及凋亡情况。[结果]成功构建人舌鳞癌顺铂耐药细胞株SCC25/DDP;顺铂作用SCC25/DDP后随着作用时间的延长LAMP2的表达逐渐升高,然而亲代SCC25细胞LAMP2的表达逐渐降低;氯喹逆转舌鳞癌顺铂耐药;敲低LAMP2后增加舌鳞癌细胞对顺铂的敏感性。[结论]顺铂诱导舌鳞癌耐药细胞株LAMP2表达升高,自噬诱导舌鳞癌细胞株顺铂耐药,敲低LAMP2表达增强舌鳞癌细胞株顺铂敏感性,抑制增殖,促进凋亡。本研究拟为解决临床舌鳞癌顺铂耐药问题提供了新思路、新方向。 

【文章来源】:昆明医科大学云南省

【文章页数】:56 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

LAMP2在舌鳞癌细胞顺铂耐药中的作用及机制研究


图1舌鱗癌顺怕耐药株的构建:SCC-25/DDP

柱状图,细胞株,氯喹,溶酶体


?v?||?|?丨"??lc3iii?J?IolljljOri?III!?III!??gapdh??C?D??8ng/ml?DDP?SCC-25/DDP?SCC-25/DDP??^?A?*<>?I?3"l?■?□?LAMP2??孑菸夕?<f?I?Hp62??LAMP2? ̄?二?|?S?2-?|?■?LC3-M????c??p62[^r??_j?!?|?|?■■??二:一?.iolllll?Iim?llll??GAPDH?丨?????图2顺钻诱导舌鱗癌耐药细胞株LAMP2表达升高。(A)?SCC-25予DDP?(8ng/ml)处理??Oh、6h、12h、24h,提取各组细胞蛋白,Western?blot检测LAMP2、LC3II、p62表达水平变??化。(B)图A的灰度分析相对值柱状图。(C)?SCC-25/DDP予DDP?(8pg/ml)处理Oh、??6h、12h、24h,提取各组细胞蛋白,Western?blot检测LAMP2、LC3II、p62表达水平变化。??(D)图C的灰度分析相对值柱状图。??3、自噬诱导舌鱗癌细胞顺钼耐药??氯喹阻断自噬体与溶酶体的融合,并碱化溶酶体,使得自噬体形成减少并不??能降解。为了进一步探索溶酶体在舌鱗癌顺铂耐药中的作用。通过MTT实验检??测SCC-25/DDP细胞的增殖活力发现,氯喹可明显提高SCC-25/DDP细胞对顺铂??的敏感性。提示氯喹通过减少自噬体的形成逆转舌鳞癌顺铂耐药,因而自噬诱导??舌鳞癌细胞顺怕耐药。??26??

柱状图,氯喹,细胞株,鳞癌


SCC-25/DDP??〇???Control??I1.0-???.?■?■?DDP??5?入--—???A?*?A?DDP^CQ??L.?'y??3?^??o.o-L-i?1?1?1???1?1—??公?N?'?、?V?b?备??Day??图3氯喹提高舌鳞癌耐药细胞株对顺钻的敏感性。MTT实验检测顺铂或顺拍+氯喹作用??SCC-25/DDP细胞后0-6天的增殖活力。??4、siRNA技术敲低LAMP2表达??基于LAMP2在溶酶体生物合成中发挥重要作用,溶酶体可影响顺铂对舌鱗??癌细胞的细胞毒性,我们想知道敲低LAMP2是否可以增敏顺铀。利用siRNA技??术敲低舌鱗癌细胞内LAMP2表达,并通过Real-time?PCR及Western?blot检测敲??低效率,发现siRNA#3敲低效果最显著。??^?tl??<1>?1.0-??LAMP2I?■???I?°?S'?|? ̄ ̄|?!_??gapdh?I?_????|?o.o-L^^H_____,____, ̄ ̄ ̄,???S???S'?S*??c?/?/?/??f15l??S??z?10'??\〇M^??y?y?y??图4?siRNA方法敲低LAMP2表达(A)?Western?blot检测敲低LAMP2的蛋白表达。??(B)图A的灰度分析相对值柱状图。(C)Realtime-PCR检测敲低LAMP2的mRNA??表达??27??

【参考文献】:
期刊论文
[1]Role of autophagy in tumorigenesis,metastasis,targeted therapy and drug resistance of hepatocellular carcinoma[J]. Fang Huang,Bing-Rong Wang,Yi-Gang Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2018(41)
[2]顺铂耐药机制研究进展[J]. 吴小雪,姚群峰.  湖北中医药大学学报. 2017(05)



本文编号:3129969

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