p65/miR-23a-27a-24调控急性髓性白血病分化的研究
发布时间：2021-04-14 03:50
研究目的:本课题旨在探索p65/mi R-23a-27a-24对急性髓性白血病的调控及其在急性髓性白血病发生发展中的作用,为急性髓性白血病的治疗提供新的理论基础和潜在的治疗靶点。研究方法:分别用Western blot和Realtime PCR技术检测急性髓性白血病细胞、白血病病人外周血单核细胞p65及mi R-23a-27a-24的表达水平。以抗白血病药物诱导急性髓性白血病细胞分化后,检测p65及mi R-23a-27a-24的水平变化。抑制p65或mi R-23a-27a-24水平后观察急性髓性白血病细胞的分化水平。构建白血病小鼠动物模型,研究p65及mi R-23a-27a-24对白血病小鼠生存期或者肿瘤扩散的影响。应用生物信息学软件结合分子手段探索p65对mi R-23a-27a-24的调节作用,并在细胞和动物水平验证p65/mi R-23a-27a-24调控轴作用。研究结果:本课题发现p65在急性髓性白血病细胞分化后表达水平降低,抑制p65水平可以促进白血病细胞分化成熟,并且检测到临床急性髓性白血病细胞（AML）和急性早幼粒细胞（APL）患者外周血单核细胞p65水平较高。通过...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
全反式维甲酸诱导NB4细胞分化，p65及p-p65表达水平检测Figure3NB-4cellsweretreatedwithATRAandthenp65andp-p65weredetected
图 4 p65 抑制剂处理 NB4细胞 3d 后，流式检测 CD11b+细胞表达水平ure 4 NB-4 cells were treated with p65 inhibitor for 3d and then the CD11b+ ccounted by flow cytometry测p65抑制剂对 NB4 细胞分化效率的影响，左图：对照组 CD11b 阳性率为化细胞的阳性率；右图： p65 抑制剂处理组 CD11b阳性率为 14.9%±1.0阳性率，发现 p65 抑制剂处理后可以提高NB4 细胞的分化率。p65 在急性髓性白血病细胞中（APL）分化后表达水平下降了进一步验证 p65 对白血病细胞分化的广泛作用，我们选取另一病细胞系 Kasumi-1 作为研究对象，利用达莎替尼（dasatinib）（1Kasumi-1 细胞分化，5d 后，流式结果显示 CD11b 的表达水平从升到给药后的 24%（图 5A），细胞分化效率得到较大的提高。同果显示 p65 及 p-p65 表达水平均降低（图 5B）。以上结果证实 d髓性白血病细胞 Kasumi-1 分化后，p65 及 p-p65 的表达水平下降
图 5 Dasatinib 诱导 Kasumi-1 细胞分化，p65 及 p-p65 表达水平检测Figure 5 Kasumi-1 cells were treated with dasatinib and then p65 and p-p65 were detected（A）流式检测 Dasatinib 对 Kasumi-1 细胞分化效率的影响，左图为对照组分化细胞阳性率统计，右图为 Dasatinib 处理组分化细胞阳性率统计；（B）Western blot 检测Dasatinib 诱导Kasumi-1 细胞分化前后p65 和 p-p65 的表达水平，Vinculin 是蛋白内参。3.1.4 抑制 p65 活性促进 Kasumi-1 细胞分化以上结果显示急性髓性白血病细胞分化也伴随着 p65 以及 p-p65 水平的下调，为进一步确定 p65 与急性髓性白血病细胞分化的关系，我们在急性髓性白血病细胞系 Kasumi-1 培养基中加入 p65 的抑制剂 PN（5μmol/ml），培养 3 天后，流式结果显示CD11b的表达水平从PN处理前的10.8%上升到处理后的24.5%（图6），以上实验结果说明 p65 活性的下降亦能够促进急性髓性白血病细胞分化。
本文编号：3136600
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
全反式维甲酸诱导NB4细胞分化，p65及p-p65表达水平检测Figure3NB-4cellsweretreatedwithATRAandthenp65andp-p65weredetected
图 4 p65 抑制剂处理 NB4细胞 3d 后，流式检测 CD11b+细胞表达水平ure 4 NB-4 cells were treated with p65 inhibitor for 3d and then the CD11b+ ccounted by flow cytometry测p65抑制剂对 NB4 细胞分化效率的影响，左图：对照组 CD11b 阳性率为化细胞的阳性率；右图： p65 抑制剂处理组 CD11b阳性率为 14.9%±1.0阳性率，发现 p65 抑制剂处理后可以提高NB4 细胞的分化率。p65 在急性髓性白血病细胞中（APL）分化后表达水平下降了进一步验证 p65 对白血病细胞分化的广泛作用，我们选取另一病细胞系 Kasumi-1 作为研究对象，利用达莎替尼（dasatinib）（1Kasumi-1 细胞分化，5d 后，流式结果显示 CD11b 的表达水平从升到给药后的 24%（图 5A），细胞分化效率得到较大的提高。同果显示 p65 及 p-p65 表达水平均降低（图 5B）。以上结果证实 d髓性白血病细胞 Kasumi-1 分化后，p65 及 p-p65 的表达水平下降
图 5 Dasatinib 诱导 Kasumi-1 细胞分化，p65 及 p-p65 表达水平检测Figure 5 Kasumi-1 cells were treated with dasatinib and then p65 and p-p65 were detected（A）流式检测 Dasatinib 对 Kasumi-1 细胞分化效率的影响，左图为对照组分化细胞阳性率统计，右图为 Dasatinib 处理组分化细胞阳性率统计；（B）Western blot 检测Dasatinib 诱导Kasumi-1 细胞分化前后p65 和 p-p65 的表达水平，Vinculin 是蛋白内参。3.1.4 抑制 p65 活性促进 Kasumi-1 细胞分化以上结果显示急性髓性白血病细胞分化也伴随着 p65 以及 p-p65 水平的下调，为进一步确定 p65 与急性髓性白血病细胞分化的关系，我们在急性髓性白血病细胞系 Kasumi-1 培养基中加入 p65 的抑制剂 PN（5μmol/ml），培养 3 天后，流式结果显示CD11b的表达水平从PN处理前的10.8%上升到处理后的24.5%（图6），以上实验结果说明 p65 活性的下降亦能够促进急性髓性白血病细胞分化。
本文编号：3136600
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