MBD2在伴有MLL融合蛋白的急性髓系白血病中的作用及其机制研究

发布时间：2021-04-17 23:06

　　【目的】现在研究结果表明,表观遗传学在肿瘤发生发展过程当中起到重要作用。伴有MLL重排的急性髓系白血病（MLL髓系白血病）以11q23染色体异位形成MLL融合蛋白为特征,是发展迅速、预后极差的一种恶性髓系白血病。随着相关机制研究的深入,组蛋白甲基化H3K79的异常与MLL白血病的相关性得到确认,进而开发了DOT1L抑制剂等靶向治疗药物。由于体内药物代谢或动力学等原因,截止目前尚无DOT1L抑制剂正式进入临床应用。新的实验研究发现,MLL髓系白血病患者基因组有异常的DNA甲基化存在,提示DNA甲基化可能是MLL治疗的另一个靶点。甲基化Cp G结合蛋白2（MBD2）是特定的DNA甲基化阅读器,通过破坏MBD2的辨认和读取能力可影响DNA甲基化在基因表达的调控,且不像传统的DNMTs抑制剂诱发全基因组的低甲基化,因此成为与DNA甲基化相关的潜在治疗靶点。本文探讨MBD2在MLL髓系白血病发病中的作用及其机制研究,并探究MBD2作为MLL髓系白血病治疗靶标的可行性。【方法】利用MBD2全身敲除小鼠与同背景的C57小鼠交配,获得杂合小鼠,进而得到同批次的MBD2全身敲除小鼠及相应的野生型小鼠。构... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

MBD2敲除小鼠杂交繁殖流程

图 1.1 MBD2 敲除小鼠杂交繁殖流程为了鉴定新生小鼠的基因型，我们根据 WT 和 MBD2-/-基因序列分别收集每只小鼠的少量尾巴或脚趾等组织，裂解并提取 DNA 进行 PCR，产物得到相应的条带[38，39]。接着，我们收集来自 WT 和 MBD2-/-小鼠（已平的鉴定）的脾脏（SP）、胸腺（Thymus）、骨髓（BM），分别进一步在基水平鉴定，确认 MBD2-/-小鼠的造血系统中 MBD2 是完全敲除[38，39]（

出现濒死状态时，留取标本，结合流式检测的结果，确定在成功构建 MLL-AF9 急性髓系白血病的小鼠模型，并因为白血病进展导致小鼠的死亡（图 2.1）。图2.1 流式细胞术分别检测MBD2敲除组及WT组小鼠发病后骨髓细胞的免疫表型3、MBD2 敲降对 MLL-AF9 白血病发生发展的影响为了研究 MBD2 对 MLL-AF9 白血病发生发展的影响，我们利用 MBD2-/-小鼠和MLL-AF9 白血病的小鼠模型，将包装有 MSCV-MLL/AF9-IRES-GFP 的逆转录病毒分别转染 MBD2 纯合敲除和对应的野生型小鼠的 c-Kit+细胞，观察两组小鼠的一般状态及生存期发现 MBD2 敲除组小鼠整体生存期更长。当小鼠出现白血病相关表现，且处于濒死状态时，断颈处死小鼠，分别收集两组小鼠的骨髓细胞并分选原代白血病细胞。体外分化克隆转化实验结果如图所示（图 3.1），根据 MLL-AF9 白血病细胞体外克隆形态的致密度不同，将克隆分为 A、B、C 三类

【参考文献】：
博士论文
[1]MBD2在正常造血和T细胞分化以及急性T淋巴细胞白血病中的作用[D]. 周密.华中科技大学 2015



本文编号：3144302