应用表面增强拉曼光谱技术进行前列腺特异性抗原的超灵敏检测
发布时间：2021-04-20 19:49
前列腺癌是男性中常见的恶性肿瘤。随着我国人口老龄化的加重,生活方式的改变,前列腺癌患者日益增多,迫切需要及时有效的诊断和治疗。前列腺特异性抗原（Prostate Specific Antigen,PSA）是前列腺癌的肿瘤标志物,广泛应用于患者的诊断分析。随着医学的发展,人们逐渐发现PSA含量的细微变化与早期发现前列腺癌,监测治疗效果和预测复发风险等存在密切关系,故对PSA的超灵敏和高时效检测具有重要意义。表面增强拉曼光谱技术（Surface-Enhanced Raman Spectroscopy,SERS）是一种利用贵金属增强拉曼信号的技术,当靶标分子分布于纳米级金属结构表面时,其拉曼信号会得到大幅的增强,故解决了传统拉曼散射信号弱的问题。SERS过程所需样品量小且不受水的干扰,根据所得的拉曼光谱能够获得靶标的结构状态、物质含量等丰富信息,这促使SERS广泛应用于生物医学和生物物理等领域。本文中,我们利用SERS技术对PSA进行了均相免疫传感超灵敏检测,以满足逐渐提高的检测要求,且整个检测过程无需进行清洗。首先,设计一对能够识别PSA的SERS探针,这两个探针上均修饰了抗体,分别结合P...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 前列腺特异性抗原（Prostate Specific Antigen,PSA）的传感研究
1.1.1 前列腺特异性抗原
1.1.2 前列腺特异性抗原检测方法和研究进展
1.2 表面增强拉曼光谱技术（Surface-Enhanced Raman Spectroscopy,SERS）的应用
1.2.1 拉曼散射原理
1.2.2 表面增强拉曼光谱技术
1.2.3 表面增强拉曼光谱技术增强机理
1.2.4 SERS检测PSA领域的研究进展
1.2.5 SERS在生物分析方面的应用
1.3 Domain Z的性质和应用
1.3.1 金黄色葡萄球菌Protein A（Staphylococcus aureus Protein A,SPA）
1.3.2 SPA的应用
1.3.3 Domain Z的应用
1.4 存在的问题
1.5 本论文的研究思路和内容
第二章 应用表面增强拉曼光谱技术均相检测PSA
2.1 前言
2.2 实验仪器和试剂
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.2.3 试剂配制
2.3 实验方法
2.3.1 合成银纳米粒子
2.3.2 银纳米颗粒和磁纳米粒子表面修饰抗体
2.3.3 SERS检测样品
2.4 实验结果
2.4.1 均相免疫传感检测PSA原理
2.4.2 传感机制的表征
2.4.3 SERS检测不同浓度PSA的结果
2.4.4 SERS检测的选择性
2.5 本章小结
第三章 Domain Z表达载体的构建、表达和纯化
3.1 实验仪器与试剂
3.2.1 实验仪器
3.2.2 样品和试剂
3.2.3 试剂的配制
3.2 实验方法
3.3.1 目的基因的设计合成及PCR扩增
3.3.2 PCR产物的纯化与鉴定
3.3.3 酶切与连接
3.3.4 连接产物的转化和筛选
3.3.5 转化大肠杆菌及蛋白表达
3.3.6 纯化融合蛋白
3.3.7 融合蛋白标签切除及目的蛋白纯化
3.3.8 Domain Z蛋白的鉴定
3.3.9 Domain Z蛋白浓度的测定
3.3 实验结果
3.3.1 目的基因合成与扩增结果
3.3.2 酶切和连接的结果
3.3.3 重组质粒的鉴定结果
3.3.4 Domain Z不同纯化阶段的电泳结果
3.3.5 Domain Z 蛋白的浓度
3.4 本章小结
第四章 Domain Z的性质以及增强效果
4.1 前言
4.2 实验仪器与试剂
4.2.1 实验仪器
4.2.2 样品和试剂
4.2.3 试剂的配制
4.3 实验方法
4.3.1 Domain Z活性的鉴定
4.3.2 在磁性纳米颗粒表面偶联Domain Z
4.3.3 制备SERS探针MNs@Domain Z@Ab2/4-ABP并进行SERS检测
4.4 实验结果
4.4.1 IgG Fc封闭效果及有效封闭浓度的确定
4.4.2 Domain Z对不同抗体亲和力的确定
4.4.3 BCA蛋白定量结果及Domain Z的偶联率
4.4.4 应用SERS探针MNs@Domain Z@Ab2/4-ABP检测PSA的结果
4.5 本章小结
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清前列腺特异性抗原的BA－ELISA测定法的建立及临床应用[J]. 韩文科,顾方六. 中华泌尿外科杂志. 1996(11)
博士论文
[1]抗体亲和层析配体的分子动力学设计及纯化抗体能力的研究[D]. 戴璐.吉林大学 2016
本文编号：3150293
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 前列腺特异性抗原（Prostate Specific Antigen,PSA）的传感研究
1.1.1 前列腺特异性抗原
1.1.2 前列腺特异性抗原检测方法和研究进展
1.2 表面增强拉曼光谱技术（Surface-Enhanced Raman Spectroscopy,SERS）的应用
1.2.1 拉曼散射原理
1.2.2 表面增强拉曼光谱技术
1.2.3 表面增强拉曼光谱技术增强机理
1.2.4 SERS检测PSA领域的研究进展
1.2.5 SERS在生物分析方面的应用
1.3 Domain Z的性质和应用
1.3.1 金黄色葡萄球菌Protein A（Staphylococcus aureus Protein A,SPA）
1.3.2 SPA的应用
1.3.3 Domain Z的应用
1.4 存在的问题
1.5 本论文的研究思路和内容
第二章 应用表面增强拉曼光谱技术均相检测PSA
2.1 前言
2.2 实验仪器和试剂
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.2.3 试剂配制
2.3 实验方法
2.3.1 合成银纳米粒子
2.3.2 银纳米颗粒和磁纳米粒子表面修饰抗体
2.3.3 SERS检测样品
2.4 实验结果
2.4.1 均相免疫传感检测PSA原理
2.4.2 传感机制的表征
2.4.3 SERS检测不同浓度PSA的结果
2.4.4 SERS检测的选择性
2.5 本章小结
第三章 Domain Z表达载体的构建、表达和纯化
3.1 实验仪器与试剂
3.2.1 实验仪器
3.2.2 样品和试剂
3.2.3 试剂的配制
3.2 实验方法
3.3.1 目的基因的设计合成及PCR扩增
3.3.2 PCR产物的纯化与鉴定
3.3.3 酶切与连接
3.3.4 连接产物的转化和筛选
3.3.5 转化大肠杆菌及蛋白表达
3.3.6 纯化融合蛋白
3.3.7 融合蛋白标签切除及目的蛋白纯化
3.3.8 Domain Z蛋白的鉴定
3.3.9 Domain Z蛋白浓度的测定
3.3 实验结果
3.3.1 目的基因合成与扩增结果
3.3.2 酶切和连接的结果
3.3.3 重组质粒的鉴定结果
3.3.4 Domain Z不同纯化阶段的电泳结果
3.3.5 Domain Z 蛋白的浓度
3.4 本章小结
第四章 Domain Z的性质以及增强效果
4.1 前言
4.2 实验仪器与试剂
4.2.1 实验仪器
4.2.2 样品和试剂
4.2.3 试剂的配制
4.3 实验方法
4.3.1 Domain Z活性的鉴定
4.3.2 在磁性纳米颗粒表面偶联Domain Z
4.3.3 制备SERS探针MNs@Domain Z@Ab2/4-ABP并进行SERS检测
4.4 实验结果
4.4.1 IgG Fc封闭效果及有效封闭浓度的确定
4.4.2 Domain Z对不同抗体亲和力的确定
4.4.3 BCA蛋白定量结果及Domain Z的偶联率
4.4.4 应用SERS探针MNs@Domain Z@Ab2/4-ABP检测PSA的结果
4.5 本章小结
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清前列腺特异性抗原的BA－ELISA测定法的建立及临床应用[J]. 韩文科,顾方六. 中华泌尿外科杂志. 1996(11)
博士论文
[1]抗体亲和层析配体的分子动力学设计及纯化抗体能力的研究[D]. 戴璐.吉林大学 2016
本文编号：3150293
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3150293.html
