CBP、NOX2、Ku70及Mre11在黑色素瘤细胞多种死亡方式中的作用研究

发布时间：2021-05-05 18:03

　　目的:探究由CBP、NOX2、Ku70及Mre11组成的基因转录调控网络调控人类黑素瘤细胞凋亡、副凋亡及坏死的机制,为发现联合调控ROS及DNA损伤修复机制治疗恶性黑色素瘤的siRNA靶向药物,和CBP缺失所致疾病的分子机制提供一定的研究基础。方法:1.分别设计合成Mre11、Ku70的特异性的siRNA各3对,采用脂质体高效转染试剂Expect2000将siRNA转染进入黑色素瘤A375细胞。2.RT-qPCR检测转染24 h后CBP、Ku70和Mre11的mRNA水平。选用70%敲低效率作为CBP siRNA和Ku70 siRNA、CBP siRNA和Mre11 siRNA单转染及共转染的剂量。3.CCK-8和流式细胞术检测转染24 h后对A375细胞增殖、死亡的影响。4.连续跟踪转染siRNA后A375细胞形态学的变化,流式细胞术转染24 h后检测ROS水平。5.RT-qPCR及Western Blot检测转染24 h后A375细胞NOX2的表达。6.DAPI染色连续跟踪转染24 h后A375细胞核的变化。7.RT-qPCR及Western Blot检测转染24 h后A375细胞... 

【文章来源】：河北大学河北省

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 研究问题的提出
    1.2 研究目的及意义
    1.3 国内外研究现状
        1.3.1 乙酰转移酶-CBP
        1.3.2 DNA损伤修复因子-Ku70
        1.3.3 DNA损伤修复因子-Mre11
    1.4 研究思路与方法
        1.4.1 研究思路与方法
        1.4.2 研究方法
    1.5 研究内容
    1.6 创新点
第二章 由CBP、Ku70、NOX2 组成的基因调控网调节黑素瘤细胞凋亡、副凋亡及坏死
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 A375 细胞的复苏与冻存
        2.3.2 绘制黑色瘤细胞生长曲线
        2.3.3 特异性siRNA序列的设计与合成
        2.3.4 siRNA的配制与转染
        2.3.5 实时荧光定量PCR检测基因的表达
        2.3.6 Western Blot检测目的蛋白的表达
        2.3.7 CCK-8 检测细胞增殖
        2.3.8 流式细胞仪检测细胞凋亡
        2.3.9 流式细胞仪检测ROS
        2.3.10 流式细胞仪检测细胞周期
        2.3.11 细胞形态学观察
        2.3.12 DAPI染色观察细胞核
        2.3.13 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 敲低CBP和/或Ku70 后抑制A375 细胞的增殖
        2.4.2 敲低CBP和/或Ku70后A375 细胞出现不同方式的死亡
        2.4.3 敲低CBP和/或Ku70后A375 细胞的形态学变化
        2.4.4 敲低CBP和/或Ku70后A375 细胞的ROS变化
        2.4.5 敲低CBP和/或Ku70 后增加A375 细胞中NOX2 的表达
        2.4.6 敲低CBP和/或Ku70 后诱导A375 细胞核降解
        2.4.7 敲低A375 细胞中CBP后通过降低Ku70 的表达诱导凋亡
        2.4.8 敲低CBP和/或Ku70 后诱导A375 细胞S期阻滞
    2.5 讨论
第三章 CBP和 Mre11 对人恶性黑色素瘤细胞发展的影响
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞复苏与冻存
        3.3.2 特异性siRNA序列的设计与合成
        3.3.3 siRNA的配制与转染
        3.3.4 实时荧光定量PCR检测目的基因的表达
        3.3.5 CCK-8 检测细胞增殖
        3.3.6 流式细胞仪检测细胞死亡
        3.3.7 流式细胞仪检测细胞周期
        3.3.8 DAPI染色观察细胞核
        3.3.9 流式细胞仪检测ROS
        3.3.10 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 敲低CBP和/或Mre11 后抑制细胞增殖
        3.4.2 敲低CBP和/或Mre11 后对A375 细胞死亡的影响
        3.4.3 敲低CBP和/或Mre11 后对A375 细胞形态学的影响
        3.4.4 敲低CBP和/或Mre11 后对A375 细胞的ROS变化
        3.4.5 敲低CBP和/或Mre11 后诱导A375 细胞核降解
        3.4.6 敲低CBP和/或Mre11 后对A375 细胞周期的影响
    3.5 讨论
结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间取得的学术成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]退火解旋酶SMARCAL1在维持基因组稳定中的作用与机制[J]. 文雅蕾,吕柯孬,徐小康,张欣,丁良,潘学峰.  遗传. 2019(12)
[2]CBP基因与肿瘤相关性研究进展[J]. 李桂香,李致玲,周栋.  医学综述. 2015(14)

硕士论文
[1]内源性ROS自稳态失衡对黑色素瘤细胞杀灭作用的研究[D]. 张欣.河北大学 2019



本文编号：3170337