T405/S406的O-GlcNAc修饰对PKM2非代谢酶功能的作用及机制研究

发布时间：2021-05-07 20:59

　　代谢重编程是肿瘤细胞的标志性特征之一,其代表性事件为Warburg效应,表现为即使在氧气充足的条件下,肿瘤细胞也要消耗大量葡萄糖进行糖酵解代谢,并产生大量的乳酸,为肿瘤细胞的快速增殖提供物质和能量保证。Warburg效应的发生受到多种代谢酶调节,其中丙酮酸激酶是催化糖酵解最后一步的限速酶,其M2型丙酮酸激酶（Pyruvate kinase M2,PKM2）在肿瘤细胞中特异性高表达,能够通过其酶活性及核内非代谢酶功能共同促进Warburg效应及肿瘤生长。PKM2功能可受乙酰化、磷酸化等多种蛋白质翻译后修饰调节。最近的研究报道,PKM2也可发生O-Glc NAc修饰。我们实验室前期工作表明,O-Glc NAc修饰能够促进PKM2解聚并入核,增强其核内非代谢酶功能,并通过质谱分析鉴定出T405和S406是PKM2的O-Glc NAc修饰位点,然而T405/S406双突变并不能完全消除PKM2 O-Glc NAc修饰,说明PKM2还存在其它的O-Glc NAc修饰位点,但是这两个位点突变后使PKM2 O-Glc NAc修饰水平明显降低。于是我们推测T405和S406可能是PKM2 O-Glc ... 

【文章来源】：东北师范大学吉林省 211工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

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一 引言
    1.Warburg效应
    2.M2型丙酮酸激酶(PKM2)
        2.1 PKM2的功能及调节
        2.2 PKM2的蛋白质翻译后修饰
    3.O-GlcNAc修饰
        3.1 O-GlcNAc修饰的酶
        3.2 O-GlcNAc修饰的供体
    4.立题依据与研究思路
二 材料和方法
    1.实验试剂
        1.1 抗体
        1.2 其它主要试剂
    2.实验材料
        2.1 细胞株及菌株
        2.2 真核表达载体
    3.实验仪器
    4.实验方法
        4.1 细胞培养
        4.2 构建质粒
        4.3 瞬时转染
        4.4 免疫印迹法(WB)
        4.5 丙酮酸激酶活性的检测
        4.6 提取细胞浆蛋白和核蛋白
        4.7 戊二醛交联试验
        4.8 蛋白质的免疫沉淀试验(IP)
        4.9 葡萄糖含量检测
        4.10 乳酸含量检测
三 实验结果
    1.OGT真核表达质粒的构建
    2.OGT过表达可上调PKM2T405/S406的O-GlcNAc修饰
    3.T405/S406的O-GlcNAc修饰促进PKM2四聚体解聚
    4.T405/S406的O-GlcNAc修饰降低PKM2酶活性
    5.T405/S406的O-GlcNAc修饰促进PKM2核易位
    6.T405/S406的O-GlcNAc修饰增强PKM2非代谢酶功能
    7.T405/S406的O-GlcNAc修饰促进Warburg效应
四 讨论
    1.T405/S406的O-GlcNAc修饰促进PKM2四聚体解聚的可能机制
    2.T405/S406的O-GlcNAc修饰促进PKM2核易位的可能机制
五 结论
参考文献
致谢



本文编号：3174050