鸦胆子苦素D靶向β-catenin/Jagged1通路抑制肝细胞癌

发布时间：2021-05-07 21:08

　　原发性肝癌是全球常见的恶性肿瘤之一,肝癌患者5年总体生存率不超过17%,目前针对晚期肝癌的一线用药仍以多重酪氨酸激酶受体抑制剂为主,其中一线抗肝癌药物索拉非尼相对安慰剂来说,仅增加了肝癌患者2.7个月的生存期,且其容易产生耐药性。目前认为,晚期肝癌药物开发策略主要为寻找靶向新通路的分子或寻找索拉非尼增敏的分子。Notch和Wnt通路是介导肝癌发生发展的重要通路,其中Wnt通路的重要转导蛋白β-catenin在肝癌中的突变率达到20-40%。实验室前期通过RBP-Jκ荧光素酶报告基因系统筛选到一个Notch通路的抑制剂鸦胆子苦素D（BD）,其能明显抑制Notch通路配体Jagged1的表达,同时对肝癌细胞有明显的抑制作用。在药效评价上,本研究通过肝癌原位移植模型进一步验证BD抗肝癌及与索拉非尼联用的效果;机制上,本研究进一步深入探究BD抗肝癌作用机制,以期为肝癌治疗提供一定的科学依据及先导化合物。研究方法:1、本研究通过裸鼠原位肝癌模型验证BD对肝癌生长作用的影响及联合索拉非尼的治疗效果;通过H&E及免疫组化技术测定BD对裸鼠肝原位肿瘤细胞生长的影响;2、通过β-catenin和... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
    一、肝癌及临床治疗简介
        （一）肝癌及其风险因素
        （二）肝癌治疗策略
        （三）肝癌临床试验药物总结
    二、Wnt信号通路与肝癌及其临床试验药物
        （一）Wnt信号通路简介
        （二）Wnt通路与肝癌
        （三）Wnt通路临床试验药物总结
    三、鸦胆子苦素类化合物的抗肿瘤研究现状
第一章 Bruceine D体内抗肿瘤及协同索拉非尼抗肝癌研究
    一、引言
    二、实验材料
        （一）实验动物
        （二）实验用具
        （三）药品和试剂
        （四）主要仪器
    三、实验方法
        （一）溶液配制
        （二）裸鼠肝癌原位异体移植瘤模型建立
        （三）药物处理和取材
        （四）细胞复苏、培养、冻存
        （五）肿瘤组织H&E染色分析
        （六）肿瘤组织免疫组织化学分析—TUNEL和Ki67
    四、实验结果
        （一）BD抑制肝癌细胞在裸鼠肝脏内生长
        （二）BD增强索拉非尼体内抗肝癌作用
    五、小结与讨论
第二章 Bruceine D抗肿瘤机制研究
    一、引言
    二、实验材料
        （一）细胞株及菌株
        （二）药品与试剂
        （三）实验仪器
    三、实验方法
        （一）细胞培养
        （二）免疫印迹实验（Western blot）
        （三）RT-PCR
        （四）shJagged1和shβ-catenin干扰实验
        （五）Wnt通路激活剂及抑制剂处理对Jagged1蛋白表达影响 35
        （六）免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）
        （七）细胞核质分离实验
        （八）免疫荧光共聚焦
        （九）Wnt3a重组蛋白及GSK3β 抑制剂处理对BD作用的影响37
        （十）蛋白酶抑制剂处理验证BD对 β-catenin降解途径的影响 37
        （十一）CRM1抑制剂处理检测BD对 β-catenin出核途径的影响
    四、实验结果
        （一）肝癌细胞上Wnt/β-catenin与Jagged1的调控关系及BD对Wnt通路转录水平的影响
        （二）BD对 β-catenin细胞核内水平的影响
        （三）BD对 β-catenin总量影响及与GSK3β 上游通路的关系 .. 41
        （四）BD诱导 β-catenin的蛋白酶体降解
        （五）BD对 β-catenin出核途径CRM1的影响
        （六）BD对肝癌组织中 β-catenin和Jagged1的表达量的影响 . 44
    五、小结与讨论
第三章 Bruceine D抗肿瘤靶标验证
    一、引言
    二、实验材料
        （一）菌株
        （二）药品与试剂
        （三）实验仪器
    三、实验方法
        （一）蛋白表达与纯化
        （二）Cellular Thermal Shift Assay（CETSA）
        （三）Protein Thermal Shift Assay
        （四）Biacore
        （五）MicroScale Thermophoresis（MST）
    四、实验结果
        （一）CETSA
        （二）Thermal Shift Assay
        （三）Biacore
        （四）MST
    五、小结与讨论
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
硕士期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Second line systemic therapies for hepatocellular carcinoma: Reasons for the failure[J]. Marcello Maida,Massimo Iavarone,Maurizio Raineri,Calogero Cammà,Giuseppe Cabibbo.  World Journal of Hepatology. 2015(17)
[2]Alcohol and hepatocellular carcinoma:A review and a point of view[J]. Gianni Testino,Silvia Leone,Paolo Borro.  World Journal of Gastroenterology. 2014(43)
[3]鸦胆子油乳抗肿瘤机制及其临床应用研究进展[J]. 赵楠,韩凤娟,王桂媛,李玉花.  生物技术通讯. 2014(05)
[4]High-intensity focused ultrasound ablation:An effective bridging therapy for hepatocellular carcinoma patients[J]. Tan To Cheung,Sheung Tat Fan,See Ching Chan,Kenneth SH Chok,Ferdinand SK Chu,Caroline R Jenkins,Regina CL Lo,James YY Fung,Albert CY Chan,William W Sharr,Simon HY Tsang,Wing Chiu Dai,Ronnie TP Poon,Chung Mau Lo.  World Journal of Gastroenterology. 2013(20)



本文编号：3174062