AGR2表位肽增强肝细胞癌对NK细胞敏感性的作用与机制研究

发布时间：2021-05-07 22:05

　　目的:肝癌是全球第二大常见的癌症,肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原发性肝癌的70%～90%是最主要的病理亚型。目前,肝癌的临床治疗手段主要有手术切除、化疗、放疗、经导管肝动脉化疗栓塞（transarterial chemoembolization,TACE）法、局部射频热消融（radiofrequency ablation,RFA）法、肝脏移植等治疗方法。肝癌手术仍然是根除肝癌的首选方法,而且肿瘤越小,五年生存率越高。然而当患者出现明显的肝癌症状就诊时,病情往往已比较严重,多数处于中晚期。肝癌晚期的患者由于不具备良好的肝储备功能,对介入化疗等治疗方法耐受力不足,常常使肝癌患者预后差,存活时间较短。因此,早期预后不良肝细胞癌患者的鉴定和中晚期肝细胞癌患者安全有效的治疗手段是目前研究的两大关键问题。肝细胞癌的发生、发展、转移和复发与机体的免疫系统密切相关,肝脏组织中含有大量的淋巴细胞,其中NK细胞约占总肝淋巴细胞的30%,远远超出了NK细胞在外周血中的占比,提示NK细胞在肝细胞癌免疫治疗中可能发挥着重要的作用。NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力取决于细胞上抑... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:AGR2 表位肽上调肝癌MICA/B表达增加肝细胞癌对NK细胞的敏感性
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料与试剂
            2.1.1 细胞来源
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 密度梯度离心法
            2.2.3 NK细胞扩增培养
            2.2.4 磁珠Buffer的配置
            2.2.5 磁珠筛选NK细胞
            2.2.6 流式细胞分析术
            2.2.7 CD107a脱颗粒实验
            2.2.8 酶联免疫吸附测定(ELISA)
            2.2.9 乳酸脱氢酶(LDH)释放实验
            2.2.10 蛋白免疫印迹实验(Western Blot)
            2.2.11 实时荧光定量PCR(q RT-PCR)
            2.2.12 统计学分析
    3 结果
        3.1 AGR2表位肽增强肝细胞癌对NK细胞杀伤作用的敏感性
        3.2 AGR2表位肽对NK细胞杀伤肝细胞癌活性无影响
        3.3 AGR2 表位肽上调肝细胞癌MICA/B的表达
    4 讨论
第二部分 :AGR2 表位肽通过P38 通路参与CHOP/AP-1 调节MICA/B的表达
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料与试剂
            2.1.1 细胞来源
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 试剂配制
            2.2.2 Western blot及 q RT-PCR
            2.2.3 染色质免疫共沉淀
            2.2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 探索AGR2 表位肽调控肝细胞癌MICA/B表达量的机制
        3.2 AGR2 表位肽通过激活p38 MAPK通路上调MICA/B表达增强对NK细胞的敏感性
        3.3 CHOP/AP-1 组合参与MICA/B的转录调控
    4 讨论
第三部分 :AGR2表位肽在体增强肝细胞癌对NK细胞的敏感性
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 试剂与仪器
            2.1.1 主要实验试剂
            2.1.2 主要实验仪器
        2.2 实验材料
            2.2.1 细胞来源
            2.2.2 实验动物
        2.3 实验方法
            2.3.1 实验动物分组
            2.3.2 移植瘤模型的建立
            2.3.3 移植瘤评估
            2.3.4 qRT-PCR
            2.3.5 Western Blot
            2.3.6 流式细胞术
            2.3.7 原代细胞提取
            2.3.8 数据统计分析
    3 结果
        3.1 成功建模NOD/SCID免疫缺陷肝癌细胞Bel-7402 荷瘤鼠
        3.2 AGR2表位肽增强了NK细胞对移植瘤的治疗作用
        3.3 AGR2 表位肽上调在体肝癌细胞MICA/B的表达
    4 讨论
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3174129