Circ-CDYL通过miR-1180靶向作用YAP影响多发性骨髓瘤细胞生存的机制研究

发布时间：2021-05-13 22:42

　　目的:多发性骨髓瘤约占血液系统恶性肿瘤的10%,是第二大常见血液系统恶性肿瘤,以浆细胞恶性克隆性增生为表现形式,目前仍然属于不可治愈的疾病。虽然目前随着自体造血干细胞移植术、治疗新药的上市以及新型免疫疗法的应用,多发性骨髓瘤治疗的疗效和患者预后已得到明显改善,5年总生存期得到明显延长,但大多数患者最终仍然以复发为结局。影响多发性骨髓瘤的疾病进展与预后的因素有很多,染色体异常、癌基因突变激活以及骨髓微环境的改变等都在多发性骨髓瘤的发病、进展及预后中起关键作用。但目前尚无判断疾病预后的理想分子指标,探索研究影响预后的因素是目前研究热点。circRNA作为一类新型非编码RNA,是一种共价闭合内源性非编码RNA。它既没有5’末端和3’末端极性,也没有PolyA尾,因此结构稳定,并且不易被核酸内切酶降解。circRNA具有组织和疾病特异性,在癌症发生发展中发挥重要的调节功能,对circRNA的深入研究对揭示肿瘤发生发展具有重要意义。circRNA具有多种生物学功能,包括作为miRNA的“海绵”吸附miRNA、翻译蛋白、调节RNA结合蛋白、调控亲本基因表达等等。目前关于circRNA功能报道最多的... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :circ-CDYL判断多发性骨髓瘤预后的可行性研究
    1前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂及耗材
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 国际生物学信息途径和计算机分析软件包
        2.2 研究对象和分组
        2.3 研究方法
            2.3.1 免疫磁珠分选多发性骨髓瘤样本
            2.3.2 对照组样本单个核细胞提取
            2.3.3 TRIzol法细胞总RNA提取
            2.3.4 cDNA链合成及反转录
            2.3.5 Realtime反应
            2.3.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 circ-CDYL在初诊MM患者中表达上调
        3.2 MM中 circ-CDYL表达水平与临床分期呈正相关
        3.3 circ-CDYL高表达可作为MM预后不良指标
    4 讨论
第二部分 :circ-CDYL通过miR-1180 调节YAP表达影响MM细胞生物学行为的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂及耗材
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 国际生物学信息途径和计算机分析软件包
        2.2 研究对象
            2.2.1 细胞株
        2.3 主要实验方法
            2.3.1 细胞培养
            2.3.2 慢病毒稳转细胞系构建
            2.3.3 cell-Light TM Ed U细胞成像实验
            2.3.4 细胞CCK-8增殖检测
            2.3.5 细胞凋亡检测
            2.3.6 circ-CDYL细胞内定位
            2.3.7 生物信息学预测circ-CDYL靶向miRNA并进行qRT-PCR实验验证
            2.3.8 circ-CDYL下拉实验
            2.3.9 荧光素酶报告基因验证实验
            2.3.10 WB检测
            2.3.11 Transwell实验
            2.3.12 统计学分析
    3 结果
        3.1 沉默circ-CDYL抑制MM细胞的增殖
        3.2 沉默circ-CDYL促进MM细胞的凋亡
        3.3 circ-CDYL靶向结合mi R-1180
        3.4 miR-1180 靶向作用YAP基因
        3.5 circ-CDYL通过mi R-1180 上调YAP的表达
        3.6 YAP上调促进MM细胞增殖与侵袭
    4 讨论
第三部分 :circ-CDYL在体内的功能研究
    1前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂及耗材
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂的配制
        2.2 研究对象和分组
        2.3 主要实验方法
            2.3.1 细胞复苏、细胞培养及传代
            2.3.2 构建裸鼠移植瘤模型
            2.3.3 qRT-PCR检测瘤体组织circ-CDYL/miR-1180/YAP的表达
            2.3.4 HE染色观察瘤细胞形态
            2.3.5 免疫组化染色检测瘤细胞中Ki-67和YAP表达
    3 结果
        3.1 circ-CDYL下调抑制裸鼠移植瘤的生长
        3.2 移植瘤组织中circ-CDYL/mi R-1180 呈负相关,mi R-1180/YAP呈负相关
        3.3 沉默circ-CDYL降低体内瘤细胞Ki-67 表达,增加YAP表达
    4 讨论
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3184834