TMEM16A型Ca 2+ 激活氯离子通道在前列腺癌细胞增殖和迁移中的作用

发布时间：2021-05-19 06:27

　　前列腺癌（Prostate cancer）是一种男性高发的恶性肿瘤,该病的患病率在全世界规模内占据男性易患肿瘤的第二位,其死亡率位居第六。早期前列腺癌可通过手术进行去势治疗,但大多数患者在治疗不久后会转变成去势抗性前列腺癌,这不仅增加了治疗的难度同时也提高了死亡率。因此探究前列腺癌的产生以及发展机制,找寻新的基因靶标和药物抑制剂,对于人类的健康以及患者寿命的延长至关重要。近年来的研究发现,一种Ca²⁺激活氯离子通道TMEM16A基因表达的变化可以参与前列腺癌的某些生物学功能的调控,但对于其调控的方式以及具体机制仍存在争议。TMEM16A（ANO1）是Anoctamin家族成员之一。该基因位于人类染色体11q13的CCND1-EMS1区域,此区域是肿瘤扩增区域,多种癌症的发生与该区域的扩增紧密相关。因此,TMEM16A可作为在前列腺癌研究中的重点对象之一。本论文选择了人的前列腺癌细胞系PC-3、LNCap、DU145以及前列腺上皮细胞RWPE-1,通过q PCR实验、免疫细胞化学以及Western Blot实验对TMEM16A在前列腺癌细胞中的表达进行分析;利用免疫... 

【文章来源】：辽宁师范大学辽宁省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 前列腺癌概述
        1.1.1 前列腺癌发生发展的风险因素
        1.1.2 前列腺癌的诊断
        1.1.3 前列腺癌的治疗方法
        1.1.4 前列腺癌常见的肿瘤标志物
        1.1.5 前列腺癌细胞系的研究进展
    1.2 Ca~(2+)激活氯离子通道TMEM16A
        1.2.1 TMEM16家族的结构
        1.2.2 TMEM16家族的功能
        1.2.3 TMEM16A的结构
        1.2.4 TMEM16A 蛋白的功能研究
        1.2.5 Ca CCs 抑制剂的研究进展
        1.2.6 TMEM16A在癌症中的研究进展
    1.3 本论文研究的目的和意义
2 TMEM16A 在前列腺癌细胞中表达及定位
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要实验材料
        2.1.2 主要实验试剂
        2.1.3 主要实验设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 实时荧光定量PCR检测细胞中的TMEM16A
        2.2.2 免疫细胞化学
        2.2.3 免疫荧光检测TMEM16A的表达定位
        2.2.4 蛋白质免疫印迹检测细胞中的TMEM16A
    2.3 实验结果
        2.3.1 TMEM16A在前列腺癌细胞中mRNA水平上的表达情况
        2.3.2 TMEM16A 在前列腺癌细胞中的表达定位情况
        2.3.3 TMEM16A在前列腺癌细胞中蛋白水平上的表达情况
    2.4 讨论
    2.5 小结
3 TMEM16A的表达在前列腺癌细胞增殖和迁移中的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 主要实验材料
        3.1.2 主要实验试剂
        3.1.3 主要实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 CCK-8检测细胞增殖活力
        3.2.2 划痕实验观察细胞的迁移
        3.2.3 Transwell检测细胞的迁移
        3.2.4 细胞转染
    3.3 实验结果
        3.3.1 药理学抑制TMEM16A的活性对前列腺癌细胞增殖的影响
        3.3.2 药理学抑制TMEM16A的活性对前列腺癌细胞迁移的影响
        3.3.3 si RNA干扰TMEM16A的表达对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
4 TMEM16A在雄激素DHT参与下对前列腺癌细胞LNCap增殖和迁移的探究
    4.1 主要实验材料与试剂
        4.1.1 主要实验材料
        4.1.2 主要实验试剂
        4.1.3 主要实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 qPCR检测TMEM16A在 LNCap细胞中的表达
        4.2.2 WB检测TMEM16A在 LNCap细胞中的表达
        4.2.3 CCK-8 检测LNCap细胞的增殖活力
        4.2.4 划痕实验观察LNCap细胞的迁移
    4.3 实验结果
        4.3.1 DHT作用于LNCap细胞后TMEM16A在 mRNA水平上的表达情况
        4.3.2 DHT作用于LNCap细胞后TMEM16A在蛋白水平上的表达情况
        4.3.3 药理学抑制对DHT参与LNCap细胞增殖的影响
        4.3.4 药理学抑制对DHT参与LNCap细胞迁移的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
5 TMEM16A参与前列腺癌细胞增殖和迁移相关信号通路的初探
    5.1 实验材料
        5.1.1 主要实验材料
        5.1.2 主要实验试剂
        5.1.3 主要实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 PC-3细胞的转染
        5.2.2 蛋白质免疫印迹实验
    5.3 实验结果
        5.3.1 TMEM16A 的表达对参与 NF-κB 通路相关增殖和迁移基因在蛋白水平上的影响
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论
本论文的创新点
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]去势抵抗性前列腺癌的治疗[J]. 吴楠,童本定,魏青.  药学与临床研究. 2015(05)
[2]三种常见的前列腺癌细胞系LNCap、PC3和DU145的生物学特性[J]. 林艳端,申锷,胡兵.  中华临床医师杂志(电子版). 2013(11)
[3]TMEM16/ANOCTAMIN:最新的氯通道家族[J]. 吴鹏,王明晓,栾海艳,李丽丽,谷瑞民.  生理科学进展. 2011(04)
[4]前列腺癌标志物的新进展[J]. 孙学健,王金良.  医学综述. 2009(16)
[5]前列腺癌标志物与年龄及膳食结构关系[J]. 杨国平,吴益民,王洪军,孙艳,董玉,尹旭辉,张志强,冯立.  中国公共卫生. 2008(05)



本文编号：3195294