EGFR/PPARδ信号调控结肠癌细胞代谢机制

发布时间：2021-05-20 01:44

　　背景:过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome-proliferators-activated receptors,PPARs）共包含PPARα、PPARδ、PPARγ三个成员。作为PPARs家族成员之一,PPARδ在调控炎症、代谢、肿瘤发生等方面发挥重要的作用,然而PPARδ转录后修饰对肿瘤进展的影响目前依然不清楚。大量研究表明表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）异常表达或激活促进肿瘤发生。EGFR属于酪氨酸激酶,我们课题组前期研究表明,EGFR能诱导PPARγ磷酸化,从而抑制PPARγ抗肿瘤功能,该研究显示EGFR能诱导底物磷酸化,从而改变其功能。然而EGFR与PPARδ相关性及其作用机制目前不是很清楚。方法:利用免疫共沉淀、Western blot分析相关蛋白的表达以及PPARδ与EGFR相关性;利用液相色谱-串联质谱法鉴定EGFR诱导PPARδ磷酸化位点;随后进一步利用体外磷酸化方法确定EGFR诱导PPARδ-Y108位点磷酸化;利用双荧光报告分析PPARδ活力,及其下游代谢相关基因SLC1A5和Glut1转录活... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 EGFR
        1.1.1 EGFR概述
        1.1.2 EGFR胞内信号传导
    1.2 PPARδ
        1.2.1 PPARδ概述
        1.2.2 PPARδ信号与肿瘤
    1.3 肿瘤细胞代谢
        1.3.1 肿瘤细胞糖代谢
        1.3.2 肿瘤细胞氨基酸代谢
    1.4 研究意义
    1.5 主要研究内容与技术路线
        1.5.1 主要研究内容
        1.5.2 技术路线
第二章 EGFR诱导PPARδ-Y108位点磷酸化
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系与质粒
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂、耗材与抗体
    2.2 实验方法
        2.2.1 质粒构建
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3 细胞加药处理
        2.2.4 质粒转染
        2.2.5 细胞总蛋白提取
        2.2.6 细胞蛋白浓度测定与定量
        2.2.7 Western blot检测
        2.2.8 免疫共沉淀
        2.2.9 磷酸化位点比对分析
        2.2.10 质谱分析
        2.2.11 蛋白纯化
        2.2.12 体外磷酸化
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 EGFR诱导PPARδ-Y108 位点磷酸化
    2.4 本章小结
第三章 EGFR/PPARδ信号促进肿瘤细胞代谢
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞系与质粒
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 实验耗材、试剂与抗体
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 质粒转染
        3.2.3 双荧光素酶报告基因检测
        3.2.4 荧光定量PCR检测
        3.2.5 Western blot检测
        3.2.6 肿瘤细胞葡萄糖消耗检测
        3.2.7 肿瘤细胞乳酸释放检测
        3.2.8 肿瘤细胞谷氨酰胺摄入检测
        3.2.9 统计学数据分析
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化增加Glut1和SLC1A5 表达
        3.3.2 PPARδ-Y108 磷酸化促进肿瘤细胞代谢
    3.4 本章小结
第四章 PPARδ-Y108 磷酸化促进肿瘤生长
    4.1 实验材料
        4.1.1 细胞系与质粒
        4.1.2 实验仪器
        4.1.3 实验试剂、耗材与抗体
        4.1.4 实验动物
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 质粒转染
        4.2.3 G418 筛选细胞
        4.2.4 软琼脂集落形成分析
        4.2.5 构建裸鼠异种移植瘤模型
        4.2.6 肿瘤组织Western blot检测
        4.2.7 统计学数据分析
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化促进肿瘤细胞增殖
        4.3.2 PPARδ-Y108 磷酸化促进肿瘤生长
    4.4 本章小结
第五章 PPARδ-Y108 磷酸化增加肿瘤细胞化疗抗性
    5.1 实验材料
        5.1.1 细胞系与质粒
        5.1.2 实验仪器
        5.1.3 实验试剂、耗材
    5.2 实验方法
        5.2.1 细胞培养
        5.2.2 质粒转染
        5.2.3 G418 筛选细胞
        5.2.4 MTT检测
        5.2.5 统计学数据分析
    5.3 实验结果与分析
        5.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化增强肿瘤细胞化疗抗性
    5.4 本章小结
第六章 总结
参考文献
致谢
在读期间学术成果
参与课题



本文编号：3196835