miR-338-3p在抑制甲状腺乳头状癌发生发展过程中的作用及其机制的研究

发布时间：2021-05-25 09:31

　　迄今为止,越来越多的证据表明,microRNA的表达失调和甲状腺癌等多种危害较大的肿瘤的发生、发展和转移密切相关。据多个研究报道,microRNA家族成员之一的miR-338-3p参与了非小细胞肺癌和神经胶质瘤等多种恶性肿瘤的发生过程。但是miR-338-3p是否也参与甲状腺癌的发生、发展和转移以及其参与调节的具体机制还远未阐明。本研究运用分子生物学、细胞生物学和动物学等实验技术来研究miR-338-3p在甲状腺乳头状癌发生、发展及侵袭转移中的作用,实验结果分以下六部分。1在甲状腺乳头状癌组织和甲状腺乳头状癌细胞系中miR-338-3p的表达显著下调。荧光实时定量PCR（qRT-PCR）结果显示,与癌旁的正常组织（adjacent noncancerous tissues,ANT）相比,miR-338-3p在甲状腺肿瘤组织中的表达明显下调,有统计学差异,p<0.01,上述实验结果提示miR-338-3p参与了甲状腺肿瘤的发生过程。同时,我们的结果提示miR-338-3p的表达水平与甲状腺肿瘤的TNM分期相关明显,甲状腺肿瘤分期越高,miR-338-3p的表达值越低。另外,在甲状腺... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 综述
    1.1 microRNA概述
    1.2 甲状腺癌
    1.3 甲状腺癌和MICRORNA的关系
        1.3.1 microRNA与PTC的关系
        1.3.2 microRNA与FTC的关系
        1.3.3 microRNA与ATC的关系
        1.3.4 microRNA与PDTC的关系
        1.3.5 microRNA与MTC的关系
        1.3.6 microRNA的合成关键蛋白和甲状腺肿瘤的关系
        1.3.7 甲状腺癌患者循环系统中microRNA的价值
        1.3.8 microRNA在甲状腺癌中的诊断价值
        1.3.9 microRNA在甲状腺癌中的筛查和判断治疗效果中价值：
    1.4 总结
第2章 材料和方法
    2.1 伦理审核
    2.2 患者资料和标本收集
    2.3 所用细胞系的培养和转染
        2.3.1 细胞复苏
        2.3.2 所用细胞系的培养及传代
        2.3.3 细胞冻存
        2.3.4 细胞转染
        2.3.5 化学合成microRNAs以及转染
    2.4 定量逆转录聚合酶链反应步骤
        2.4.1 试剂和器具的处理方法
        2.4.2 总RNA提取
        2.4.3 电泳分析总RNA
        2.4.4 逆转录反应步骤
        2.4.5 Real-time PCR
        2.4.6 qRT-PCR实验结果分析
    2.5 TPC-1 甲状腺癌细胞活性以及克隆能力的测定
        2.5.1 MTT法检测细胞活性
        2.5.2 TPC-1 甲状腺癌细胞克隆能力检测
    2.6 细胞迁移实验/划伤模型
    2.7 细胞侵袭实验
    2.8 荧光报告质粒构建
        2.8.1 质粒构建
        2.8.2 所需溶液和试剂的配置
        2.8.3 目的片段PCR扩增
        2.8.4 质粒载体以及PCR产物的双酶切鉴定及凝胶回收
        2.8.5 粘性末端的连接
        2.8.6 质粒DNA的转化
        2.8.7 质粒DNA的小量提取
        2.8.8 酶切鉴定
        2.8.9 质粒大量提取
        2.8.10 紫外分光光度计定量
        2.8.11 点突变质粒载体的构建
    2.9 荧光报告系统检测
    2.10 Western blot实验步骤
        2.10.1 主要试剂和溶液的配置
        2.10.2 细胞总蛋白的提取
        2.10.3 组织总蛋白提取
        2.10.4 实验步骤
    2.11 小鼠移植瘤模型构建
        2.11.1 实验动物购置
        2.11.2 小鼠移植瘤模型构建步骤
    2.12 材料和仪器
        2.12.1 主要实验试剂
        2.12.2 主要仪器和材料
    2.13 数据处理和统计学检验
第3章 结果
    3.1 在甲状腺乳头状癌组织和甲状腺肿瘤细胞系中miR3383p的表达显著下调
    3.2 体内和体外实验证实miR3383p可以抑制甲状腺乳头状癌的生长
    3.3 miR3383P可以抑制甲状腺乳头状癌的侵袭和转移
    3.4 AKT3是miR3383p的调控靶点
    3.5 AKT3可以促进甲状腺乳头状癌的发生发展
    3.6 AKT3可以部分逆转miR3383p对甲状腺乳头状癌的抑制作用
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Use of thyroglobulin as a tumour marker[J]. Buddhike Sri Harsha Indrasena.  World Journal of Biological Chemistry. 2017(01)



本文编号：3205108