靶向结直肠癌细胞中Survivin-XIAP复合物的抗肿瘤多肽开发及机制研究

发布时间：2021-05-27 14:21

　　目的:作为凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族的两个重要成员,survivin和X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）在包括结直肠癌在内的众多肿瘤组织中显著高表达,参与了肿瘤发生发展的众多生物学过程,一直被认为是肿瘤治疗的潜在靶标。既往研究报道,survivin可以与XIAP形成IAP-IAP复合物,使XIAP稳定,进而协同抑制Caspase 9的活性、发挥抗凋亡作用。因此,本研究旨在开发一种全新的靶向survivin-XIAP复合物的抗肿瘤多肽并探索其在结直肠癌细胞中的抗肿瘤机制。研究方法:1、利用在线数据库Oncomine和GEPIA分析IAPs在包括结直肠癌在内的多种肿瘤组织及正常组织中的表达;2、设计并合成靶向survivin-XIAP复合物的抗肿瘤多肽Sur-X,Con作为阴性对照;3、免疫共沉淀法检测结直肠癌细胞中survivinXIAP复合物的形成以及Sur-X对survivin和XIAP结合的影响;4、利用MTT法、集落形成实验检测Sur-X对结直... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :设计靶向结直肠癌细胞中Survivin-XIAP复合物的抗肿瘤多肽Sur-X
    1前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 在线数据分析
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 蛋白免疫印迹(Western blot)
            2.2.4 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation, Co-IP)
            2.2.5 共聚焦显微镜成像
            2.2.6 MTT法检测细胞活力
            2.2.7 集落形成实验
            2.2.8 裸鼠皮下移植瘤+瘤内注射模型
            2.2.9 裸鼠皮下移植瘤+静脉注射模型
            2.2.10 统计学分析
    3 结果
        3.1 Survivin和 XIAP在结直肠癌组织中高表达
        3.2 设计靶向结直肠癌细胞中Survivin-XIAP复合物的多肽Sur-X
        3.3 Sur-X可特异、有效地抑制结直肠癌细胞生长
        3.4 Sur-X显著抑制裸鼠体内肿瘤生长而无明显的毒性作用
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :Sur-X促进结直肠癌细胞发生凋亡和程序性坏死
    6前言
    7 材料与方法
        7.1 主要试剂和仪器
            7.1.1 主要试剂
            7.1.2 主要仪器
        7.2 实验方法
            7.2.1 细胞培养
            7.2.2 实时凋亡&坏死检测
            7.2.3 Caspase3 活性检测
            7.2.4 蛋白免疫印迹(Western blot)检测蛋白水平
            7.2.5 q RT-PCR检测m RNA表达
            7.2.6 蛋白质稳定性检测
            7.2.7 免疫共沉淀(Co-IP)
            7.2.8 Annexin V/7-AAD流式检测
            7.2.9 瑞士-吉姆萨染色
            7.2.10 分子动力模拟预测Sur-X与 XIAP的结合位点
            7.2.11 细胞转染
            7.2.12 MTT检测细胞活力
            7.2.13 酶联免疫吸附实验(ELISA)
            7.2.14 免疫组织化学染色
            7.2.15 TUNEL染色
            7.2.16 统计学分析
    8 结果
        8.1 Sur-X通过靶向Survivin-XIAP复合物、促进Survivin和 XIAP降解,诱导结直肠癌细胞发生凋亡
            8.1.1 Sur-X诱导结直肠癌细胞发生内源性凋亡
            8.1.2 Sur-X促进结直肠癌细胞中Survivin和 XIAP降解
            8.1.3 Sur-X对 XIAP与 Caspase9 之间的相互作用无明显影响
            8.1.4 Z-VAD仅部分逆转Sur-X诱导的结直肠癌细胞死亡
        8.2 Sur-X干扰XIAP和 TAB1 之间的相互作用、加速TAK1 降解,促进结直肠癌细胞发生程序性坏死
            8.2.1 Sur-X使结直肠癌细胞快速丧失细胞膜完整性
            8.2.2 Sur-X促进结直肠癌细胞发生程序性坏死
            8.2.3 Sur-X抑制结直肠癌细胞中XIAP与 TAB1 之间的相互作用
            8.2.4 Sur-X促进结直肠癌细胞中TAK1 降解,降低TAK1、p-TAK1 的表达
            8.2.5 TAK1抑制结直肠癌细胞发生程序性坏死
            8.2.6 敲减TAK1 可恢复TAB1-OE细胞对Sur-X诱导的程序性坏死的敏感性
            8.2.7 Sur-X仅引起NF-κB信号通路的短暂激活
        8.3 Sur-X在裸鼠体内同时诱导结直肠癌细胞发生凋亡和程序性坏死
    9 讨论
    10 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]增强采样分子动力学模拟在生物分子研究中的进展（英文）[J]. 王安辉,张志超,李国辉.  Chinese Journal of Chemical Physics. 2019(03)
[2]TRAF3 Interacts with Smac/DIABLO and Enhances the Proapoptotic Effect of Smac/DIABLO in Cytoplasm[J]. Cuili ZHANG~(1,2);Lei XIE~4;Hai’en CHENG~3;and Yingxiong WANG~2 ~1Clinical Laboratory,Sichuan Corps Hospital of The people’s Armed Police Forces,Leshan 614000,China;~2Department of Procreation Medicine,Chongqing Medical Universtity,Chongqing 400016,China;~3Clinical Laboratory,Second Affiliated Hospital Zhejiang University College of Medicine,Hangzhou 310009,China;~4Sitchuan Corps Hospital The People’s Armed Police Forces,Leshan 614000,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(02)



本文编号：3207733