LPS通过激活酸性鞘磷脂酶/神经酰胺信号通路诱导人肺腺癌细胞pc9和A549凋亡
发布时间：2021-06-05 04:17
目的酸性鞘磷脂酶（acid sphingomyelinase,ASMase）是鞘磷脂/神经酰胺（ceramide,Cer）信号通路的关键酶,在细胞产生Cer的过程中起着至关重要的的作用;Cer主要以生物活性鞘脂的形式存在于细胞,在内皮细胞中高度富集,可对多种细胞应激作出反应,在许多生理和病理过程中起着重要作用,目前,对于癌症的研究Cer是前沿话题。脂多糖（即革兰氏阴性菌的内毒素,由磷脂-多糖-蛋白质复合物组成,LPS）当给与一定浓度的剂量刺激时可诱导肺癌细胞凋亡,但其中所涉及的分子机制尚不清楚。在此,我们研究了ASMase的作用和ASMase/Cer通路在LPS诱导的人肺腺癌细胞（pc9、A549）凋亡中的作用,为肺癌甚至各种肿瘤的治疗提供新的临床思路。方法1.使肺腺癌细胞pc9和A549暴露于不同浓度的LPS（200,150,100,50,10和0μg/ml）处理24,36和48小时,通过CCK-8凋亡试剂盒,选取适当的诱导细胞凋亡的适宜的浓度和时间。2.给予细胞不同浓度的丙咪嗪（imipramine,IM,酸性鞘磷脂酶抑制剂）处理,CCK-8法检测细胞活力,选取浓度最大但对细胞本身...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
用LPS和IM处理pc9和A549细胞36小时，与对照组相比，LPS处理组细胞形态改变（放大倍数200x），*P＜0.05，**P＜0.01
安徽医科大学硕士学位论文-35-图4IM和LPS对人肺腺癌pc9和A549细胞ASK1和caspase-3mRNA水平的影响。用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM处理两种细胞36h后，用RT-PCR方法检测ASK1和caspase-3mRNA的表达水平。与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与对应的LPS处理组相比，#P＜0.05，##P＜0.01。Figure4EffectsofIMandLPSonASK1andcaspase-3mRNAlevelsofpc9andA549.Cellsweretreatedwith0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIMfor36h,mRNAlevelofASK1andcaspase-3mRNAweredetectedbyRT-PCR.Comparingwiththecontrolgroup,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.ComparingwiththecorrespondingLPStreatmentgroup,#P＜0.05,##P＜0.01.
安徽医科大学硕士学位论文-36-用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM处理pc9和A54936h后，应用Westernblot法检测pc9和A549细胞中ASK1、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白表达水平的变化，实验至少重复三次。如图所示，与对照组相较，LPS处理组明显增加了细胞中cleavedcaspase-3、ASK1和caspase-3的蛋白量的表达，差异具有统计学意义(P<0.01)；而LPS与IM共孵育时，从结果可以看出两种细胞中cleavedcaspase-3、ASK1和caspase-3蛋白质的表达量可显著被抑制，而且差异具有统计学意义(P<0.01)。与此同时测算出clcas-3与caspase-3的灰度值比值，观察两组蛋白的表达量的变化。图5IM和LPS对人肺腺癌pc9细胞ASK1、caspase-3和clcas-3蛋白水平的影响。用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM处理两种细胞36h后，用Westernblot方法检测三种蛋白的表达水平。与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与对应的LPS处理组相比，#P＜0.05，##P＜0.01。测算出clcas-3与caspase-3的灰度值比值。Figure5EffectsofIMandLPSonASK1、caspase-3andclcas-3proteinlevelsofpc9.Cellsweretreatedwith0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIMfor36h,expressionlevelsofthethreeproteinsweredetectedbyWesternblot.Comparingwiththecontrolgroup,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.ComparingwiththecorrespondingLPStreatmentgroup,#P＜0.05,##P＜0.01.Calculatingthegrayvalueclcas-3/caspase-3.3.4Westernblot法检测LPS诱导的pc9和A549细胞凋亡相关蛋白ASK1、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白表达水平的变化
本文编号：3211419
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
用LPS和IM处理pc9和A549细胞36小时，与对照组相比，LPS处理组细胞形态改变（放大倍数200x），*P＜0.05，**P＜0.01
安徽医科大学硕士学位论文-35-图4IM和LPS对人肺腺癌pc9和A549细胞ASK1和caspase-3mRNA水平的影响。用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM处理两种细胞36h后，用RT-PCR方法检测ASK1和caspase-3mRNA的表达水平。与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与对应的LPS处理组相比，#P＜0.05，##P＜0.01。Figure4EffectsofIMandLPSonASK1andcaspase-3mRNAlevelsofpc9andA549.Cellsweretreatedwith0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIMfor36h,mRNAlevelofASK1andcaspase-3mRNAweredetectedbyRT-PCR.Comparingwiththecontrolgroup,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.ComparingwiththecorrespondingLPStreatmentgroup,#P＜0.05,##P＜0.01.
安徽医科大学硕士学位论文-36-用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM处理pc9和A54936h后，应用Westernblot法检测pc9和A549细胞中ASK1、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白表达水平的变化，实验至少重复三次。如图所示，与对照组相较，LPS处理组明显增加了细胞中cleavedcaspase-3、ASK1和caspase-3的蛋白量的表达，差异具有统计学意义(P<0.01)；而LPS与IM共孵育时，从结果可以看出两种细胞中cleavedcaspase-3、ASK1和caspase-3蛋白质的表达量可显著被抑制，而且差异具有统计学意义(P<0.01)。与此同时测算出clcas-3与caspase-3的灰度值比值，观察两组蛋白的表达量的变化。图5IM和LPS对人肺腺癌pc9细胞ASK1、caspase-3和clcas-3蛋白水平的影响。用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM处理两种细胞36h后，用Westernblot方法检测三种蛋白的表达水平。与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与对应的LPS处理组相比，#P＜0.05，##P＜0.01。测算出clcas-3与caspase-3的灰度值比值。Figure5EffectsofIMandLPSonASK1、caspase-3andclcas-3proteinlevelsofpc9.Cellsweretreatedwith0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIMfor36h,expressionlevelsofthethreeproteinsweredetectedbyWesternblot.Comparingwiththecontrolgroup,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.ComparingwiththecorrespondingLPStreatmentgroup,#P＜0.05,##P＜0.01.Calculatingthegrayvalueclcas-3/caspase-3.3.4Westernblot法检测LPS诱导的pc9和A549细胞凋亡相关蛋白ASK1、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白表达水平的变化
本文编号：3211419
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3211419.html
