基于UHPLC-MS/MS技术的细胞代谢组学方法的建立及应用
发布时间：2021-06-05 17:39
胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,我国是胃癌高发区,因人口基数较大,胃癌人群数量居全球首位。并且男性比女性发病率高,进展快。但是早期胃癌的诊断水平低下,以致患者没有得到及时治疗而丧失生命。因此,寻找一种新的早期胃癌诊断方法有很重要的意义。胃癌的发生会伴随着体内代谢紊乱,如氨基酸代谢、糖酵解途径、三羧酸循环等能量代谢异常。本论文基于UHPLC-MS/MS技术,对胃癌MGC-803细胞及经雄、雌激素刺激的MGC-803细胞中氨基酸、糖酵解、三羧酸循环等进行代谢组学分析,并且对24种氨基酸进行绝对定量分析,具体研究内容如下。一、建立了MGC-803细胞中氨基酸、糖类及有机酸代谢的UHPLC-MS/MS分析方法（1）建立了细胞样品前处理方法,通过对细胞收集、淬灭、洗涤溶剂、提取溶剂、破碎方法等优化,最终确定了一套系统的细胞样品前处理方法。（2）建立了氨基酸、糖类物质及有机酸的液相色谱、质谱分析条件。采用UPLC BEH Amide（1.7μm,2.1×100 mm,Waters）色谱柱,梯度洗脱,运行时间45 min。质谱条件:电喷雾离子化（ESI）,正、负离子分别检测,采用多反应离子监测（MR...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同胃癌细胞MGC-803样品总离子流图
图 2. 2 分析物峰面积的日间精密度2.3.3 主成分分析本实验通过 LC-MS 采集得到细胞样本的总离子流图，将其结果通过MultiQuantTM3.0 软件进行处理，将正、负离子模式下的代谢物合并，导入到MarkerView1.2.1 软件进行主成分分析（PCA）进行分析，其得分图（score plot）如图 2.3 所示，图中每个点都代表一个样本，从图中可以看出所有的样本分成 3个范围，同一组的样本在同一个范围。因为这些样本的位置是由于代谢物的特点决定的，所有的胃癌细胞或经雄、雌激素刺激的细胞样本，生理病理状态相似，所以每组样本具有相似的代谢物组成，在得分图上也处在比较相似的位置，样本之间距离越远代表两组之间的代谢物差异越大，反应的细胞样品之间生理状态相差越大。在总得分图上可以看到，胃癌 MGC-803 细胞与经雄、雌激素刺激的细胞之间能较好的分离开来，并且组内的差异都相对较小。QC 样本的分布比较集中，说明在检测样本过程中，仪器响应稳定。
如图 2.1。图 2. 1 不同胃癌细胞 MGC-803 样品总离子流图2.3.2 仪器稳定性对质控样品（QC）进行检测，连续测定 3 天，对待测物的峰面积和保留时间进行日内、日间精密度分析。保留时间的日内、日间 RSD%值在 5%以内；峰面积的 RSD%在 20%以内的有 92%以上，说明仪器稳定。95 个待测物峰面积的RSD%在各范围的比例，如图 2.2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]胃癌组织氨基酸代谢的研究[J]. 赵春临,董志远,余洋,张红雨,李鹏辉,王水生,丁朝辉,徐化楠. 河南医学研究. 2017(15)
[2]胃癌生物标志物的相关研究进展[J]. 邵明洋,李文慧,杨静,韩跃武,贾茹涵. 检验医学与临床. 2017(10)
[3]肿瘤标志物CEA、AFP、CA19-9和CA72-4的检测在消化系统恶性肿瘤中的应用[J]. 刘兰凤,田斌,刘海燕,邓虎重,霍立刚. 国际检验医学杂志. 2017(05)
[4]膳食因素对中国居民胃癌影响的Meta分析[J]. 于婷婷,舒晓亮,雷涛,史哲溪,曾瑞翔. 实用癌症杂志. 2016(09)
[5]葡萄糖转运蛋白1与肿瘤能量代谢关系的研究进展[J]. 余苏云,刘兆国,贾琦,陈力川,祝娉婷,陈文星,王爱云,陆茵. 中国药理学通报. 2016(07)
[6]胃液氨基酸谱作为胃癌标志物的潜在价值[J]. 刘金哲,周丽雅. 世界华人消化杂志. 2016(13)
[7]单中心1199例胃癌患者男女异质性临床病理分析[J]. 周学付,吴晖,王亮,彭建军,张常华,陈创奇,蔡世荣,何裕隆. 消化肿瘤杂志(电子版). 2015(04)
[8]胃癌研究相关文献热点变化分析[J]. 王晓瑜. 临床军医杂志. 2015(09)
[9]血清CA153、CA199、CA125及CEA联合检测在肿瘤诊断中的价值研究[J]. 陈敏,李康成,黄铁军. 深圳中西医结合杂志. 2015(05)
[10]肿瘤标记物联合动态监测在胃癌诊断和监控治疗中的临床应用[J]. 郑加荣,张敏,徐日,徐风亮. 中华临床医师杂志(电子版). 2015(03)
本文编号：3212611
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同胃癌细胞MGC-803样品总离子流图
图 2. 2 分析物峰面积的日间精密度2.3.3 主成分分析本实验通过 LC-MS 采集得到细胞样本的总离子流图，将其结果通过MultiQuantTM3.0 软件进行处理，将正、负离子模式下的代谢物合并，导入到MarkerView1.2.1 软件进行主成分分析（PCA）进行分析，其得分图（score plot）如图 2.3 所示，图中每个点都代表一个样本，从图中可以看出所有的样本分成 3个范围，同一组的样本在同一个范围。因为这些样本的位置是由于代谢物的特点决定的，所有的胃癌细胞或经雄、雌激素刺激的细胞样本，生理病理状态相似，所以每组样本具有相似的代谢物组成，在得分图上也处在比较相似的位置，样本之间距离越远代表两组之间的代谢物差异越大，反应的细胞样品之间生理状态相差越大。在总得分图上可以看到，胃癌 MGC-803 细胞与经雄、雌激素刺激的细胞之间能较好的分离开来，并且组内的差异都相对较小。QC 样本的分布比较集中，说明在检测样本过程中，仪器响应稳定。
如图 2.1。图 2. 1 不同胃癌细胞 MGC-803 样品总离子流图2.3.2 仪器稳定性对质控样品（QC）进行检测，连续测定 3 天，对待测物的峰面积和保留时间进行日内、日间精密度分析。保留时间的日内、日间 RSD%值在 5%以内；峰面积的 RSD%在 20%以内的有 92%以上，说明仪器稳定。95 个待测物峰面积的RSD%在各范围的比例，如图 2.2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]胃癌组织氨基酸代谢的研究[J]. 赵春临,董志远,余洋,张红雨,李鹏辉,王水生,丁朝辉,徐化楠. 河南医学研究. 2017(15)
[2]胃癌生物标志物的相关研究进展[J]. 邵明洋,李文慧,杨静,韩跃武,贾茹涵. 检验医学与临床. 2017(10)
[3]肿瘤标志物CEA、AFP、CA19-9和CA72-4的检测在消化系统恶性肿瘤中的应用[J]. 刘兰凤,田斌,刘海燕,邓虎重,霍立刚. 国际检验医学杂志. 2017(05)
[4]膳食因素对中国居民胃癌影响的Meta分析[J]. 于婷婷,舒晓亮,雷涛,史哲溪,曾瑞翔. 实用癌症杂志. 2016(09)
[5]葡萄糖转运蛋白1与肿瘤能量代谢关系的研究进展[J]. 余苏云,刘兆国,贾琦,陈力川,祝娉婷,陈文星,王爱云,陆茵. 中国药理学通报. 2016(07)
[6]胃液氨基酸谱作为胃癌标志物的潜在价值[J]. 刘金哲,周丽雅. 世界华人消化杂志. 2016(13)
[7]单中心1199例胃癌患者男女异质性临床病理分析[J]. 周学付,吴晖,王亮,彭建军,张常华,陈创奇,蔡世荣,何裕隆. 消化肿瘤杂志(电子版). 2015(04)
[8]胃癌研究相关文献热点变化分析[J]. 王晓瑜. 临床军医杂志. 2015(09)
[9]血清CA153、CA199、CA125及CEA联合检测在肿瘤诊断中的价值研究[J]. 陈敏,李康成,黄铁军. 深圳中西医结合杂志. 2015(05)
[10]肿瘤标记物联合动态监测在胃癌诊断和监控治疗中的临床应用[J]. 郑加荣,张敏,徐日,徐风亮. 中华临床医师杂志(电子版). 2015(03)
本文编号：3212611
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