稳定表达HBeAg的肝癌细胞株的建立、鉴定及其生物学特性研究
发布时间：2021-06-11 02:38
目的目前关于HBeAg的研究多集中在临床分析,对肝癌细胞及其微环境的影响及作用机制的研究较少,我们利用慢病毒载体技术构建HBeAg基因稳定表达的Hep G2肝癌细胞株,鉴定转染后细胞中HBeAg的表达,研究HBeAg的表达对Hep G2细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法参照GenBank中人HBeAg基因序列化学合成目的基因片段,构建携带HBe Ag基因序列的慢病毒载体,依靠慢病毒转染技术将HBeAg基因转染进入Hep G2细胞基因组,通过嘌呤霉素筛选和单克隆培养获得转染细胞株,使用RT-qPCR、Western blot技术检测转染后细胞HBeAg的转录和翻译水平,IFMA法检测细胞上清液中HBeAg的表达。CCK-8实验、克隆形成实验,Transwell小室实验检测转染后细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化。并于传代培养3个月后检测转染细胞株HBeAg mRNA和蛋白表达水平、细胞生物学特性有无明显变化。结果成功构建携带HBeAg基因序列的慢病毒载体,慢病毒产物测序结果与GenBank数据库中HBe Ag序列对比同源性为100%。使用慢病毒转染Hep G2细胞,经嘌呤霉素筛选获得转染H...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒载体结构示意图
28图 1-2 慢病毒产物测序后对比结果Fig. 1-2 Lentivirus product sequencing comparison results同的 MOI 值转染后荧光显微镜观察转染细胞荧光表达情况病毒转染后将细胞置于荧光显微镜 100 倍视野下观察，荧光内绿色荧光，如图 1-3（图 A、B、C、D、E、F 转染细胞所值分别为 3、6、9、12、15、18），随着 MOI 值增大荧光细胞
29图 1-3 不同 MOI 值条件下慢病毒转染细胞荧光成像效果。(所有图片均为显微镜 100 倍视野A、B、C、D、E、F 对应的 MOI 值分别为 3、6、9、12、15、18。Fig. 1-3 Fluorescence images of lentivirus transfected cells under different MOI values. (×100)esponding MOI values for A, B, C, D, E, and F are 3, 6, 9, 12, 15, 18, respectively. 单克隆培养转染细胞嘌呤霉素筛选 1 周后进行单克隆培养，10d 后单细胞克隆形
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性乙型肝炎防治指南（2015年更新版）[J]. 王贵强,王福生,成军,任红,庄辉,孙剑,李兰娟,李杰,孟庆华,赵景民,段钟平,侯金林,贾继东,唐红,盛吉芳,彭劼,鲁凤民,谢青,魏来. 临床肝胆病杂志. 2015(12)
[2]慢性乙肝患者HBV-DNA定量与血清HBeAg的相关性分析[J]. 段德令,沈雪曼,史秋霞. 海南医学院学报. 2015(10)
[3]膀胱癌相关因子研究进展[J]. 朱娟娟,曾芸,杨宝学. 中国肿瘤临床. 2013(12)
[4]Application of Traditional Chinese Medicine injection in treatment of primary liver cancer:a review[J]. Mouduo Li,Cuixia Qiao,Liping Qin,Junyong Zhang,Changquan Ling,Department of Traditional Chinese Medicine,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China Mouduo Li,Cuixia Qiao,Graduate School of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China Changquan Ling,E-Institute of Traditional Chinese Medicine Internal Medicine of universities in Shanghai,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China.. Journal of Traditional Chinese Medicine. 2012(03)
[5]慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg水平的相关性分析[J]. 李筠竹,张振华,张亚飞,苏倩,李旭. 实用肝脏病杂志. 2012(03)
[6]TLR接头蛋白研究进展[J]. 董秋萍,李涛,熊自忠. 基础医学与临床. 2011(01)
[7]HBeAg与原发性肝癌和病毒相关因素的分析[J]. 于静,刘博伟,袁媛,兰玲,张昊,贾长河. 肿瘤防治研究. 2010(12)
[8]乙肝病毒表面抗原持续表达的新致病机制[J]. 赵超,田晓晨,闻玉梅. 生命科学. 2010(11)
[9]HBV DNA阳性肝癌患者血清HBeAg检测与肝细胞癌复发转移的关系[J]. 陈健,施民新,刘继斌. 现代肿瘤医学. 2009(11)
[10]HBeAg和P53突变在肝癌发生中的作用[J]. 马进安,马芳,邱振华. 第四军医大学学报. 2008(10)
本文编号：3223634
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒载体结构示意图
28图 1-2 慢病毒产物测序后对比结果Fig. 1-2 Lentivirus product sequencing comparison results同的 MOI 值转染后荧光显微镜观察转染细胞荧光表达情况病毒转染后将细胞置于荧光显微镜 100 倍视野下观察，荧光内绿色荧光，如图 1-3（图 A、B、C、D、E、F 转染细胞所值分别为 3、6、9、12、15、18），随着 MOI 值增大荧光细胞
29图 1-3 不同 MOI 值条件下慢病毒转染细胞荧光成像效果。(所有图片均为显微镜 100 倍视野A、B、C、D、E、F 对应的 MOI 值分别为 3、6、9、12、15、18。Fig. 1-3 Fluorescence images of lentivirus transfected cells under different MOI values. (×100)esponding MOI values for A, B, C, D, E, and F are 3, 6, 9, 12, 15, 18, respectively. 单克隆培养转染细胞嘌呤霉素筛选 1 周后进行单克隆培养，10d 后单细胞克隆形
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性乙型肝炎防治指南（2015年更新版）[J]. 王贵强,王福生,成军,任红,庄辉,孙剑,李兰娟,李杰,孟庆华,赵景民,段钟平,侯金林,贾继东,唐红,盛吉芳,彭劼,鲁凤民,谢青,魏来. 临床肝胆病杂志. 2015(12)
[2]慢性乙肝患者HBV-DNA定量与血清HBeAg的相关性分析[J]. 段德令,沈雪曼,史秋霞. 海南医学院学报. 2015(10)
[3]膀胱癌相关因子研究进展[J]. 朱娟娟,曾芸,杨宝学. 中国肿瘤临床. 2013(12)
[4]Application of Traditional Chinese Medicine injection in treatment of primary liver cancer:a review[J]. Mouduo Li,Cuixia Qiao,Liping Qin,Junyong Zhang,Changquan Ling,Department of Traditional Chinese Medicine,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China Mouduo Li,Cuixia Qiao,Graduate School of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China Changquan Ling,E-Institute of Traditional Chinese Medicine Internal Medicine of universities in Shanghai,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China.. Journal of Traditional Chinese Medicine. 2012(03)
[5]慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg水平的相关性分析[J]. 李筠竹,张振华,张亚飞,苏倩,李旭. 实用肝脏病杂志. 2012(03)
[6]TLR接头蛋白研究进展[J]. 董秋萍,李涛,熊自忠. 基础医学与临床. 2011(01)
[7]HBeAg与原发性肝癌和病毒相关因素的分析[J]. 于静,刘博伟,袁媛,兰玲,张昊,贾长河. 肿瘤防治研究. 2010(12)
[8]乙肝病毒表面抗原持续表达的新致病机制[J]. 赵超,田晓晨,闻玉梅. 生命科学. 2010(11)
[9]HBV DNA阳性肝癌患者血清HBeAg检测与肝细胞癌复发转移的关系[J]. 陈健,施民新,刘继斌. 现代肿瘤医学. 2009(11)
[10]HBeAg和P53突变在肝癌发生中的作用[J]. 马进安,马芳,邱振华. 第四军医大学学报. 2008(10)
本文编号：3223634
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