哇巴因抑制Wnt/β-catenin入核的机制及其对食管癌耐药性的影响
发布时间：2021-06-11 12:31
目的:本研究拟构建食管鳞癌EC109细胞耐药亚系,通过体内外实验探讨Ouabain通过抑制Wnt/β-catenin的入核实现对食管癌耐药株EC109/CDDP细胞CDDP耐药性的影响,期望为今后食管癌顺铂耐药逆转的研究提供实验依据、开辟新的思路。方法:1、通过顺铂间歇给药诱导的方法构建对顺铂耐药的人食管鳞癌细胞株采用中等剂量顺铂间歇给药方式对EC109细胞进行诱导,建立起对顺铂耐药的人食管鳞癌细胞株。在顺铂存在的情况下,用MTT法检测EC109细胞的生长抑制率,计算半数抑制浓度（IC50）;通过Annexin V-FITC/PI双标法检测两种细胞的凋亡率;CCK-8法测定EC109和EC109/CDDP细胞对CDDP的耐药性;通过流式细胞术方法（Fluorescence Activted cell sorter,FACS）检测两种细胞的细胞周期分布情况;Transwell检测这两种细胞在顺铂作用后的侵袭能力。2、Ouabain通过抑制Wnt/β-catenin的入核实现对食管癌EC109/CDDP细胞的影响通过MTT法检测Ouabain、CDDP及Ouabain联合CDDP对EC10...
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
-gp的结构图Fig1StructurediagramofP-glycoprotein
图2经典的Wnt信号通路和非经典的Wnt信号通路Fig 2 Classical Wnt signaling pathway and non classical Wnt signaling pathway要[42]。在经典 Wnt 信号通路中，受到这种信号刺激后，相应的 Wnt 蛋zzled 与 LRP5/6 受体结合而开启此这种信号通路，并活化胞质内 Dsh 蛋活化状态后可以抑制由 APC 蛋白、GSK- 3β、形成的 GSK-3β 的活性，链蛋白的磷酸化，这样泛素蛋白酶体就不能识别且降解此种蛋白，进而积聚。当 β-catenin 大量积累后就进入到胞核，并和其中的 TCF/LEFs 游靶基因的启动子暴露出来而被激活表达，导致细胞异常增殖。Wnt 信下，细胞质中的 β-catenin 与 APC、Axin、GSK-3β、酪蛋白激酶（Casein起形成多蛋白复合物；当 GSK-3β 磷酸化 β-catenin 的 Ser33、Ser37 和CK 磷酸化 β-catenin 的 ser45 残基后，泛素化依赖的 β-TrCP 蛋白会活化解，减少进入核内启动转录因子的 β-catenin 的水平，形成细胞的正常调nin 和这种通路的作用发挥存在密切的关系，是整条通路的关键枢纽分子
1.1顺铂耐药细胞的诱导培养结果每次加入顺铂四十八小时内，显微镜观察 EC109 细胞，发现细胞处于静止生长状态。弃去含有顺铂培养基，并用预热 PBS 洗涤，加入正常无药培养液，细胞的形态出现了明显的变化，变钝变圆，体积也明显的缩小，且从瓶壁脱落，最终大部分的细胞脱落下来，小部分呈现集落。大部分的细胞是对顺铂耐药程度较差的细胞，而占比例大约 5 %左右的小部分细胞，就是培养的耐药细胞。七天后细胞又逐渐恢复生长接着进行同样剂量顺铂冲击后，继续上述过程，发现细胞形态变化程度没有之前明显存活的剩下的细胞比例不断在增加。显微镜下发现细胞形态没有出现明显的变化，但核稍变大，核/浆比例有一定的提高，且出现了很少的多角形细胞（Fig 3）。采用相同条件的药物冲击处理数月，最终得到可对 0.5 μg/ml 顺铂含药培养液耐药的可传代的人 ESCC 耐药细胞株，其耐药能力与野生型细胞相比差异极显著。复苏生长后，速度和野生型细胞接近。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Neoadjuvant treatment for esophageal squamous cell carcinoma[J]. Yoshifumi Baba,Masayuki Watanabe,Naoya Yoshida,Hideo Baba. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2014(05)
[2]分次电离辐射对食管癌细胞HIF-1α及MDR1表达的影响[J]. 高蕊,张广健,付军科,金鑫,张明鑫,李芬. 南方医科大学学报. 2010(05)
[3]食管癌中uPA、uPAR蛋白表达及其临床意义[J]. 祝淑钗,王亚飞,沈文斌,李娟,苏景伟,王玉祥. 肿瘤防治研究. 2008(07)
[4]抑癌基因PTEN与食管癌关系研究进展[J]. 林杰成,李志雄,林文霖. 现代肿瘤医学. 2008(05)
[5]Detection of apoptosis induced by new type gosling viral enteritis virus in vitro through fluorescein annexin V-FITC/PI double labeling[J]. Shun Chen, Avian Diseases Research Centre, College of Veterinary Medicine of Sichuan Agricultural University, Yaan 625014, Sichuan Province, China An-Chun Cheng, Ming-Shu Wang, Xi Peng, Avian Diseases Research Centre, College of Veterinary Medicine of Sichuan Agricultural University; Key Laboratory of Animal Diseases and Human Health of Sichuan Province, Yaan 625014, Sichuan Province, China Ming-Shu Wang, College of Life Science and Technology of Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, Sichuan Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2008(14)
[6]食管癌肿瘤标志物研究进展[J]. 张红蕾,高春芳,胡文华. 中国肿瘤临床与康复. 2007(04)
[7]食管癌分子生物学的研究进展[J]. 刘培,黄勇. 现代医药卫生. 2007(05)
[8]哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡与胱冬酶-3及bcl-2基因家族的关系[J]. 熊安秀,王敏,金润铭,白燕,林雯. 中国实验血液学杂志. 2006(05)
[9]顺铂耐药性L1210细胞亚系的建立及特征[J]. 程军平,魏小龙,茹祥斌,冯杏婉,张永祥. 中国药理学通报. 2000(06)
[10]卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞株的建立及其多药耐药蛋白的表达[J]. 陈建利,杨瑞芳,刘福生,江森,孙晓明. 中华妇产科杂志. 2000(10)
本文编号：3224541
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
-gp的结构图Fig1StructurediagramofP-glycoprotein
图2经典的Wnt信号通路和非经典的Wnt信号通路Fig 2 Classical Wnt signaling pathway and non classical Wnt signaling pathway要[42]。在经典 Wnt 信号通路中，受到这种信号刺激后，相应的 Wnt 蛋zzled 与 LRP5/6 受体结合而开启此这种信号通路，并活化胞质内 Dsh 蛋活化状态后可以抑制由 APC 蛋白、GSK- 3β、形成的 GSK-3β 的活性，链蛋白的磷酸化，这样泛素蛋白酶体就不能识别且降解此种蛋白，进而积聚。当 β-catenin 大量积累后就进入到胞核，并和其中的 TCF/LEFs 游靶基因的启动子暴露出来而被激活表达，导致细胞异常增殖。Wnt 信下，细胞质中的 β-catenin 与 APC、Axin、GSK-3β、酪蛋白激酶（Casein起形成多蛋白复合物；当 GSK-3β 磷酸化 β-catenin 的 Ser33、Ser37 和CK 磷酸化 β-catenin 的 ser45 残基后，泛素化依赖的 β-TrCP 蛋白会活化解，减少进入核内启动转录因子的 β-catenin 的水平，形成细胞的正常调nin 和这种通路的作用发挥存在密切的关系，是整条通路的关键枢纽分子
1.1顺铂耐药细胞的诱导培养结果每次加入顺铂四十八小时内，显微镜观察 EC109 细胞，发现细胞处于静止生长状态。弃去含有顺铂培养基，并用预热 PBS 洗涤，加入正常无药培养液，细胞的形态出现了明显的变化，变钝变圆，体积也明显的缩小，且从瓶壁脱落，最终大部分的细胞脱落下来，小部分呈现集落。大部分的细胞是对顺铂耐药程度较差的细胞，而占比例大约 5 %左右的小部分细胞，就是培养的耐药细胞。七天后细胞又逐渐恢复生长接着进行同样剂量顺铂冲击后，继续上述过程，发现细胞形态变化程度没有之前明显存活的剩下的细胞比例不断在增加。显微镜下发现细胞形态没有出现明显的变化，但核稍变大，核/浆比例有一定的提高，且出现了很少的多角形细胞（Fig 3）。采用相同条件的药物冲击处理数月，最终得到可对 0.5 μg/ml 顺铂含药培养液耐药的可传代的人 ESCC 耐药细胞株，其耐药能力与野生型细胞相比差异极显著。复苏生长后，速度和野生型细胞接近。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Neoadjuvant treatment for esophageal squamous cell carcinoma[J]. Yoshifumi Baba,Masayuki Watanabe,Naoya Yoshida,Hideo Baba. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2014(05)
[2]分次电离辐射对食管癌细胞HIF-1α及MDR1表达的影响[J]. 高蕊,张广健,付军科,金鑫,张明鑫,李芬. 南方医科大学学报. 2010(05)
[3]食管癌中uPA、uPAR蛋白表达及其临床意义[J]. 祝淑钗,王亚飞,沈文斌,李娟,苏景伟,王玉祥. 肿瘤防治研究. 2008(07)
[4]抑癌基因PTEN与食管癌关系研究进展[J]. 林杰成,李志雄,林文霖. 现代肿瘤医学. 2008(05)
[5]Detection of apoptosis induced by new type gosling viral enteritis virus in vitro through fluorescein annexin V-FITC/PI double labeling[J]. Shun Chen, Avian Diseases Research Centre, College of Veterinary Medicine of Sichuan Agricultural University, Yaan 625014, Sichuan Province, China An-Chun Cheng, Ming-Shu Wang, Xi Peng, Avian Diseases Research Centre, College of Veterinary Medicine of Sichuan Agricultural University; Key Laboratory of Animal Diseases and Human Health of Sichuan Province, Yaan 625014, Sichuan Province, China Ming-Shu Wang, College of Life Science and Technology of Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, Sichuan Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2008(14)
[6]食管癌肿瘤标志物研究进展[J]. 张红蕾,高春芳,胡文华. 中国肿瘤临床与康复. 2007(04)
[7]食管癌分子生物学的研究进展[J]. 刘培,黄勇. 现代医药卫生. 2007(05)
[8]哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡与胱冬酶-3及bcl-2基因家族的关系[J]. 熊安秀,王敏,金润铭,白燕,林雯. 中国实验血液学杂志. 2006(05)
[9]顺铂耐药性L1210细胞亚系的建立及特征[J]. 程军平,魏小龙,茹祥斌,冯杏婉,张永祥. 中国药理学通报. 2000(06)
[10]卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞株的建立及其多药耐药蛋白的表达[J]. 陈建利,杨瑞芳,刘福生,江森,孙晓明. 中华妇产科杂志. 2000(10)
本文编号：3224541
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