二甲双胍诱导膀胱癌细胞发生自噬及其机制研究
发布时间：2021-06-17 00:26
[目 的]膀胱癌是一个重要的全球公共卫生问题,2018年全球范围内最新癌症统计,膀胱癌的新发病率在恶性肿瘤中居第四位,病死率位居第八位。在我国,膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤,其在逐渐影响我国居民的健康状况。近年来越来越多的证据表明二甲双胍不仅具有显著的降糖作用,而且在多种类型癌症中也发挥重要的抗肿瘤作用,该机制主要与AMPK的活化、降低m TOR信号通路和蛋白的表达相关。而自噬作为癌症治疗的潜在新靶点,其自噬相关的m TOR信号途径,对于肿瘤细胞生长,增殖和存活均起着重要作用。所以该课题的研究可以为二甲双胍在临床泌尿系统肿瘤的预防和治疗中提供理论基础。[方法]采用膀胱癌细胞株BIU-87进行体外细胞实验,用MTT 比色实验检测对不同浓度二甲双胍在不同的作用时间BIU-87细胞的活力测定;采用透射电子显微镜（TEM）观察不同浓度不同时间二甲双胍处理组自噬体的形态及数量;采用细胞自噬染色检测试剂盒（MDC法）应用荧光显微镜检测膀胱癌细胞自噬体形态及数量;Western blot法检测不同浓度二甲双胍作用6小时,12小时,24小时后自噬标志性蛋白LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的表达。采用West...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１二甲双胍对膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞增殖活力的影响??
Ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??（％?ｃｅｌｌ?ｖｏｕｌｕｍｅ）??〇６圈?Ｄ?１２ｈ???＊??圏?Ｃａ?２４ｈ??０．４－??〇＂＿ｉ?ｌｌ?ｌｌ?．１??Ｕ．Ｕ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０?１０?２０?４０??Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ?（ｍ．Ｍ）??Ｄ．??图３透射电镜观察二甲双胍作用于膀胱癌细胞ＢＩＵ－８７的自噬体情况??图Ａ为不同浓度（ＯｍＭ，ｌＯｍＭ，２０ｍＭ，４０ｍＭ）二甲双胍分别作用于膀脫癌细胞??１２ｈ，２４ｈ后自噬体的表达情况；图Ｂ，?Ｃ，Ｄ为对照姐及实验组分别作用不同时间??１２ｈ，２４ｈ的自噬体占细胞总数百分比的情况，与对照组相比，＊：ｐ＜０．０５，?＊＊＊＊：ｐ＜??０．０００１，Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ?为二甲双胍。??４．?ＭＤＣ荧光染色检测自噬体??ＭＤＣ荧光染色检测自噬体作为自噬体检测的非特异性检测方法。不同浓度??（０ｍＭ、１０ｍＭ，２０ｍＭ，４０ｍＭ）二甲双胍分别作用于人膀胱癌细胞１２ｈ，２４ｈ，收集??各组细胞，采用ＭＤＣ自噬荧光染色试剂盒进行染色，用荧光显微镜观察自噬体??的形成，及自噬体数量、形态及大小并采集图像（见图４－Ａ＞?，并分别计数对照??组及实验组作用于人膀胱癌细胞１２ｈ，２４ｈ的自噬体数量（见图４－Ｂ，４－Ｃ）。实验??结果显示：与对照组相比，随着二甲双胍的浓度不断增加，自噬体形成的数量亦??明显增加，且呈浓度依赖性。??２７??
蛋白灰度值分析??１．６??ｌｌ．?ｉ［?．Ｉ．?．１．?ｌｌ．?．９．??０?２４ｈ?０?４８ｈ?１０?２４ｈ?１０４８ｈ?２０?２４ｈ?２０４８ｈ??■样品名称Ｐ＿ｐ７〇ｓ６ｋ?■样品名称ｐ－４ＥＢＰｌ?■样品名称ｐ－ＡＫＴ??ｃ．??图５二甲双胍诱导膀胱癌细胞的自噬相关通路下游蛋白的表达情况??图Ａ，Ｂ为Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测二甲双胍作用于膀胱癌细胞的自噬信号通路ｍＴＯＲＣｌ??和ｍＴ０ＲＣ２途径下游蛋白的表达情况；图Ｃ，为Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测二甲双胍作用??于膀胱癌细胞的自噬信号通路下游蛋白灰度值分析图。Ｍｅｔ为二甲双胍。??３０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Autophagy in cerebral ischemia and the effects of traditional Chinese medicine[J]. Xiao-ping Huang,Huang Ding,Jin-dong Lu,Ying-hong Tang,Bing-xiang Deng,Chang-qing Deng. Journal of Integrative Medicine. 2015(05)
本文编号：3234083
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１二甲双胍对膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞增殖活力的影响??
Ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??（％?ｃｅｌｌ?ｖｏｕｌｕｍｅ）??〇６圈?Ｄ?１２ｈ???＊??圏?Ｃａ?２４ｈ??０．４－??〇＂＿ｉ?ｌｌ?ｌｌ?．１??Ｕ．Ｕ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０?１０?２０?４０??Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ?（ｍ．Ｍ）??Ｄ．??图３透射电镜观察二甲双胍作用于膀胱癌细胞ＢＩＵ－８７的自噬体情况??图Ａ为不同浓度（ＯｍＭ，ｌＯｍＭ，２０ｍＭ，４０ｍＭ）二甲双胍分别作用于膀脫癌细胞??１２ｈ，２４ｈ后自噬体的表达情况；图Ｂ，?Ｃ，Ｄ为对照姐及实验组分别作用不同时间??１２ｈ，２４ｈ的自噬体占细胞总数百分比的情况，与对照组相比，＊：ｐ＜０．０５，?＊＊＊＊：ｐ＜??０．０００１，Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ?为二甲双胍。??４．?ＭＤＣ荧光染色检测自噬体??ＭＤＣ荧光染色检测自噬体作为自噬体检测的非特异性检测方法。不同浓度??（０ｍＭ、１０ｍＭ，２０ｍＭ，４０ｍＭ）二甲双胍分别作用于人膀胱癌细胞１２ｈ，２４ｈ，收集??各组细胞，采用ＭＤＣ自噬荧光染色试剂盒进行染色，用荧光显微镜观察自噬体??的形成，及自噬体数量、形态及大小并采集图像（见图４－Ａ＞?，并分别计数对照??组及实验组作用于人膀胱癌细胞１２ｈ，２４ｈ的自噬体数量（见图４－Ｂ，４－Ｃ）。实验??结果显示：与对照组相比，随着二甲双胍的浓度不断增加，自噬体形成的数量亦??明显增加，且呈浓度依赖性。??２７??
蛋白灰度值分析??１．６??ｌｌ．?ｉ［?．Ｉ．?．１．?ｌｌ．?．９．??０?２４ｈ?０?４８ｈ?１０?２４ｈ?１０４８ｈ?２０?２４ｈ?２０４８ｈ??■样品名称Ｐ＿ｐ７〇ｓ６ｋ?■样品名称ｐ－４ＥＢＰｌ?■样品名称ｐ－ＡＫＴ??ｃ．??图５二甲双胍诱导膀胱癌细胞的自噬相关通路下游蛋白的表达情况??图Ａ，Ｂ为Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测二甲双胍作用于膀胱癌细胞的自噬信号通路ｍＴＯＲＣｌ??和ｍＴ０ＲＣ２途径下游蛋白的表达情况；图Ｃ，为Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测二甲双胍作用??于膀胱癌细胞的自噬信号通路下游蛋白灰度值分析图。Ｍｅｔ为二甲双胍。??３０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Autophagy in cerebral ischemia and the effects of traditional Chinese medicine[J]. Xiao-ping Huang,Huang Ding,Jin-dong Lu,Ying-hong Tang,Bing-xiang Deng,Chang-qing Deng. Journal of Integrative Medicine. 2015(05)
本文编号：3234083
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