miR-325-3p/DPAGT1轴失调介导HCC化疗耐药性的研究
发布时间：2021-06-18 00:09
研究背景:乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）阳性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者标准化化疗方案中出现的化疗耐药会导致疾病出现不良预后。因而,亟待深入研究HBV+HCC耐药机制。阐明其耐药的分子机制以及开发新的关键治疗靶点,将为患者提供新的治疗策略。方法:构建两组对阿霉素（doxorubicin,DOX）有抗性的HBV阳性肝细胞癌细胞系HepG2.2.15和Huh7-1.3。采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术分析体外培养的HBV+HCC化疗敏感性和耐药细胞系中己糖胺通路基因的表达,蛋白免疫印迹（Western blots）、荧光素酶报告基因分析和体内种瘤技术,进一步研究揭示miRNA-325-3p/DPAGT1轴在HBV+HCC化疗抗性中的作用。结果:长醇磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖磷酸转移酶1（dolichyl-phosphate N-acetylglucosamine phosphotransferase 1,DPAGT1）在两种耐药肝癌细胞系中表达水平均...
【文章来源】：蚌埠医学院安徽省
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
证明DPAGT1在DOX耐药HCC细胞中的过表达水平（A）用不同浓度的DOX处理HepG2.2.15和Huh7-1.3细胞，48小时后，测定细胞存活率以确定化学敏感性，产生了HepG2.2.15/DOX-R和Huh7-1.3/DOX-R细胞系
21图2.DPAGT1介导的体内/体外HCC耐药性表达水平（A）Westernblot（B）免疫荧光，DPAGT1干扰对HepG2.2.15/DOX-R和Huh7-1.3/DOX-R的影响，比例尺：20μm。（C）对用DOX（1μM）处理48小时的细胞进行CCK-8分析（D）半胱天冬酶活性进行凋亡分析。DPAGT1敲低及其对DOX-R耐药细胞的影响（E）免疫荧光，在MHCC-97H细胞中过表达DPAGT1-V264G或DPAGT1-Y170C（比例尺：20μm）。（F）CCK8（G）细胞凋亡，对MHCC-97H化学敏感性的影响。（H）DPAGT1敲低对Huh7-1.3DOX-R异种移植肿瘤生长的影响（每组n=9）。（I、J）Ki67和caspase-3的染色，比例尺：100μm。（K）在DOX和衣霉素的情况下MHCC-97H来源的异种移植肿瘤的生长（n=9只小鼠）。（J、M）Ki67和CC-3IHC染色。*P<0.05，**P<0.01。
243.4miR-325-3p逆转体内/体外HBV+HCC细胞中DPAGT1对DOX-R的作用过表达miR-325-3p细胞对DOX的化学敏感性显着增加，抑制miR-325-3p后DOX-R细胞对DOX的化学敏感性降低（图4A-B）。抗miR-325-3p恢复DPAGT1表达后，化学抗性的抑制作用减少。（图4A-B）。为了验证miR-325-3p在体内对DOX化学敏感性的进展，在模拟miR-325-3p的小鼠模型中，观察到肿瘤组织中miR-325-3p表达水平显著升高(图4C)，肿瘤生长受到部分抑制(图4D)。肿瘤生长曲线显示，加入miR-325-3p模拟物的Huh7-1.3/DOX-R细胞DOX敏感性显著增加（图4D），同时显示出细胞增殖减少和凋亡增加（图4E-F）。这些结果证明了miR-325-3p在逆转HBV+HCC化学耐药性中的作用。
本文编号：3236179
【文章来源】：蚌埠医学院安徽省
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
证明DPAGT1在DOX耐药HCC细胞中的过表达水平（A）用不同浓度的DOX处理HepG2.2.15和Huh7-1.3细胞，48小时后，测定细胞存活率以确定化学敏感性，产生了HepG2.2.15/DOX-R和Huh7-1.3/DOX-R细胞系
21图2.DPAGT1介导的体内/体外HCC耐药性表达水平（A）Westernblot（B）免疫荧光，DPAGT1干扰对HepG2.2.15/DOX-R和Huh7-1.3/DOX-R的影响，比例尺：20μm。（C）对用DOX（1μM）处理48小时的细胞进行CCK-8分析（D）半胱天冬酶活性进行凋亡分析。DPAGT1敲低及其对DOX-R耐药细胞的影响（E）免疫荧光，在MHCC-97H细胞中过表达DPAGT1-V264G或DPAGT1-Y170C（比例尺：20μm）。（F）CCK8（G）细胞凋亡，对MHCC-97H化学敏感性的影响。（H）DPAGT1敲低对Huh7-1.3DOX-R异种移植肿瘤生长的影响（每组n=9）。（I、J）Ki67和caspase-3的染色，比例尺：100μm。（K）在DOX和衣霉素的情况下MHCC-97H来源的异种移植肿瘤的生长（n=9只小鼠）。（J、M）Ki67和CC-3IHC染色。*P<0.05，**P<0.01。
243.4miR-325-3p逆转体内/体外HBV+HCC细胞中DPAGT1对DOX-R的作用过表达miR-325-3p细胞对DOX的化学敏感性显着增加，抑制miR-325-3p后DOX-R细胞对DOX的化学敏感性降低（图4A-B）。抗miR-325-3p恢复DPAGT1表达后，化学抗性的抑制作用减少。（图4A-B）。为了验证miR-325-3p在体内对DOX化学敏感性的进展，在模拟miR-325-3p的小鼠模型中，观察到肿瘤组织中miR-325-3p表达水平显著升高(图4C)，肿瘤生长受到部分抑制(图4D)。肿瘤生长曲线显示，加入miR-325-3p模拟物的Huh7-1.3/DOX-R细胞DOX敏感性显著增加（图4D），同时显示出细胞增殖减少和凋亡增加（图4E-F）。这些结果证明了miR-325-3p在逆转HBV+HCC化学耐药性中的作用。
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