shRNA干扰沉默ERCC1对A549/DDP细胞增殖与凋亡的影响

发布时间：2021-06-25 18:25

　　目的前期研究发现ERCC1基因可能参与顺铂继发耐药,文中旨在探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默切除修复交叉互补基因组1（ERCC1）对不同浓度顺铂处理的肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响。方法实验分为阴性对照组（shRNA）、空白对照组（lipofectamine 2000）、ERCC1-shRNA1组（ERCC1-shRNA1）、ERCC1-shRNA2组（ERCC1-shRNA2）。设计并合成靶向人的ERCC1基因shRNA1、shRNA2;采用脂质体lipofectamine 2000转染入A549/DDP细胞,通过Real-time PCR和Western blot分别检测转染前后ERCC1 mRNA和蛋白表达;MTT法检测转染后各组细胞增殖抑制率的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果成功构建ERCC1-shRNA并转入A549/DDP,ERCC1-shRNA1组、ERCC1-shRNA2组mRNA表达量[（0.20±0.04）、（0.47±0.28）]明显低于阴性对照组和空白对照组[（0.96±0.12）、（0.84±0.07）],差异均有统计学意义... 

【文章来源】：医学研究生学报. 2017,30(06)北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 主要材料和试剂
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 shRNA的设计与构建
        1.2.3 质粒抽提
        1.2.4 转染
        1.2.5 实时荧光定量PCR
        1.2.6 Western blot实验
        1.2.7 MTT法测定顺铂对RNA干扰前后的A549/DDP细胞的半数抑制浓度
        1.2.8 流式细胞仪分析细胞周期
        1.2.9 流式细胞仪分析细胞凋亡
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 RT-PCR检测转染后细胞ERCC1的mRNA表达
    2.2 Western blot检测转染后细胞ERCC1的蛋白表达
    2.3 MTT法检测转染后A549/DDP对顺铂半数抑制量的变化
    2.4 ERCC1-shRNA1对细胞周期的阻滞作用
    2.5 ERCC1-shRNA1对细胞凋亡的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]RNAi沉默ERCC1基因对肺腺癌细胞顺铂敏感性的影响[J]. 王巍炜,巫正伟,王德光,张勇.  重庆医学. 2016(28)
[2]肺癌的流行病学及治疗现状[J]. 姚晓军,刘伦旭.  现代肿瘤医学. 2014(08)
[3]顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1、Bcl-2表达的相关性研究[J]. 金艺凤,何贝,刘东华,王莹.  中国临床药理学与治疗学. 2013(07)
[4]非小细胞肺癌化疗药物敏感基因表达及其临床病理特征分析[J]. 罗春英,王璇,时姗姗,周晓军,马恒辉,王建东.  医学研究生学报. 2013(05)
[5]DNA修复基因多态性与非小细胞肺癌患者含铂方案化疗预后的关系[J]. 金艺凤,蒋静涵,黄群联,王莹,刘东华.  中国老年学杂志. 2012(09)
[6]切除修复交叉互补酶1在非小细胞肺癌中的表达及其对术后铂类辅助化疗的影响[J]. 吴颖,宋勇,刘红兵.  医学研究生学报. 2009(02)



本文编号：3249715