AMPK/PPARα通路在应激状态下调控CPT1C表达影响人甲状腺乳头状癌细胞存活的研究

发布时间：2021-07-02 10:43

　　研究背景和研究目的:甲状腺癌作为内分泌系统常见的恶性肿瘤,在头颈部肿瘤中占有很大比率,居女性恶性肿瘤第四位,其中乳头状甲状腺癌占绝大多数。肉碱脂酰转移酶1（CPT1）作为一种β-氧化途径的关键酶,对脂肪酸分解代谢具有重要调控作用。目前CPT1主要有CPT1A、CPT1B、CPT1C三个家族成员存在。作为调控代谢的限速酶,越来越多研究发现,在肿瘤的代谢过程中CPT1同样起着重要调节作用。CPT1在各个组织和细胞中表达有很大差异,具有一定组织特异性:其中CPT1A分布较为广泛,在多数组织中存在,在肝脏部位高表达;CPT1B则是主要分布在肌肉部位;CPT1C则主要分布在脑部,主要集中在中枢神经系统,例如海马体、杏仁核和下丘脑核,在认知和学习,摄食行为和身体能量消耗以及情绪应对的内分泌调节中都起着很重要的作用。CPT1C是CPT1家族中唯一能被p53调控的蛋白质,腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是细胞能量代谢调节的关键分子。为了维持增殖和侵袭能力,肿瘤细胞会对其能量代谢过程进行调节,在这些过程中,AMPK发挥非常重要的作用。研究发现,AMPK的激活能够诱导c AMP反应元件结合蛋白（CREB）的... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：博士

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摘要
abstract
缩略词表
前言
第一章 代谢应激条件下CPT1C表达与甲状腺乳头状癌细胞的存活关系研究
    一、实验仪器和材料
        (一)主要试剂
        (二)主要仪器及耗材
        (三)溶液配制
    二、方法
        (一)收集肿瘤患者临床样本
        (二)提取组织中总RNA
        (三)逆转录
        (四)荧光实时定量PCR
        (五)细胞株培养和瞬时转染
        (六)CCK-8细胞增殖检测
        (七)细胞周期检测
        (八)细胞凋亡检测
        (九)细胞迁移检测
        (十)统计学分析
    三、结果
        (一)CPT1C在人乳头状甲状腺癌组织和癌旁组织中的表达情况
        (二)CPT1C对乳头状甲状腺癌细胞生物学功能的影响
        (三)代谢应激对乳头状甲状腺癌细胞系中CPT1C表达的影响
        (四)CPT1C表达水平对乳头状甲状腺癌细胞在代谢应激状态下存活的影响。
第二章 代谢应激下乳头状甲状腺癌细胞中CPT1C表达上调的分子机制研究
    一、实验仪器和材料
        (一)主要试剂
        (二)主要仪器及耗材
        (三)溶液配制
    二、实验方法
        (一)细胞培养
        (二)细胞转染过程
        (三)合成基因进行测序
        (四)质粒提取
        (五)蛋白免疫印迹
        (六)实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)
        (七)细胞凋亡检测
        (八)统计学分析
    三、结果
        (一)应激状态下KTC-1 细胞AMPK、PPARα分子活性改变情况
        (二)激活AMPK可上调KTC-1 细胞中CPT1C的表达水平
        (三)代谢应激条件下,AMPK抑制剂能够有效削减PPARα、CPT1C的表达增加,促进细胞凋亡,降低肿瘤细胞活力
第三章 代谢应激下乳头状甲状腺癌细胞中PPARα调控CPT1C表达影响细胞的存活
    一、材料和方法
        (一)主要试剂
        (二)主要仪器及耗材
        (三)溶液配制
    二、实验方法
        (一)细胞培养
        (二)细胞转染过程
        (三)目的基因CDS区域设计合成
        (四)合成基因测序鉴定
        (五)质粒提取
        (六)蛋白免疫印迹
        (七)实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)
        (八)荧光素酶报告基因检测
        (九)统计学分析
    三、结果
        (一)PPARα对CPT1C表达水平的影响
        (二)PPARα对CPT1C转录的调控作用
    四、讨论
参考文献
综述 肉毒碱脂酰转移酶1C介导肿瘤细胞生长的分子机制研究进展
    参考文献
个人简历
博士在读期间第一作者作者发表的论文
致谢



本文编号：3260319