WDR74在TGF-β信号通路中功能与机制的研究

发布时间：2021-07-05 15:50

　　转化生长因子β（Transforming growth factor-β,TGF-β）超家族信号在调控细胞增殖,细胞凋亡,细胞分化,细胞迁移及细胞命运决定过程中发挥着重要的作用。经典的TGF-β信号通路由跨膜的丝氨酸/苏氨酸激酶受体和胞内效应蛋白Smad蛋白组成。当TGF-β信号通路被激活,磷酸化的R-Smad（Smad2和Smad3）会和Co-Smad（Smad4）结合形成三元复合体并转录入核。Smad复合体会和很多细胞核里面的转录促进因子或者抑制因子结合,共同调控基因转录。因此,TGF-β信号转导需要Smad和众多转录因子或者Smad结合蛋白的参与。WDR74 属于 WD40 repeat proteins 超家族,WDR74 包含 6 个 WD40 区域,并且在进化上保守。WDR74第一次被发现是在肺转移的犬乳腺细胞中高表达,这表明WDR74很可能跟癌症转移有很大的相关性。另外,已有研究也表明WDR74对小鼠的胚胎发育至关重要。近年来,多篇文献报道证实,WDR74跟核糖体的形成至关重要。虽然WD40 repeat蛋白超家族在多种细胞功能,如细胞分裂,细胞命运决定,基因转录,细胞跨... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

经典的TGF

２．结果和分析??２．１?ＷＤＲ７４和Ｓｍａｄ２／３在细胞内存在相互作用??我们将目的质粒?ＨＡ－Ｓｍａｄ２，?ＨＡ－Ｓｍａｄ３，?ＦＬＡＧ－ＷＤＲ７４?和?Ｍｙｃ－ＴｐＲＩ?（Ｔ２０２Ｄ）??转染到ＨＥＫ２９３Ｔ细胞中，进行蛋白免疫共沉淀实验。用ＦＬＡＧ抗体去ＩＰ带有ＨＡ??ｔａｇ的Ｓｍａｄ２和Ｓｍａｄ３。实验结果表明在细胞内ＷＤＲ７４和Ｓｍａｄ２，?Ｓｍａｄ３确实存??在相互作用，并且这一作用在持续激活的ＴＧＦ－Ｐ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ?Ｉ?－ＡＬＫ５?（Ｔ２０２Ｄ）存在的??情况下变得更强（图２．１．１）。内源的蛋白免疫共沉淀实验也得到了相同的结论。??ＨａＣａＴ细胞中，ＴＧＦ－ｐ处理细胞１小时，用内源的Ｓｍａｄ２／３抗体去内源的??ＷＤＲ７４，抗兔的ＩｇＧ作为阴性对照。实验结果表明ＷＤＲ７４和Ｓｍａｄ２和Ｓｍａｄ３的??相互作用在ＴＧＦ－Ｐ的作用下变得更强（图２．１．２）。??Ｆｌａｇ－ＷＤＲ７４?＋?＋?＋?＋??－－?－－?－Ｆｌａｇ－ＷＤＲ７４?＋?＋?＋?＋??

ＨＡ－ＷＤＲ７４蛋白４°Ｃ旋转孵育４小时，然后洗ｂｅａｄｓ，?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测。??ＧＳＴ－Ｐｕｌｌｄｏｗｎ实验结果表明，ＧＳＴ－Ｓｍａｄ２／３／４和ＨＡ－ＷＤＲ７４之间存在直接的相互??作用，并且ＷＤＲ７４和Ｓｍａｄ２，?Ｓｍａｄ３，?Ｓｍａｄ４之间的亲和能力大致一样（图２．２）。??１９??

【参考文献】：
期刊论文
[1]TGF-β信号通路调控乳腺癌上皮-间质转化的研究进展[J]. 马艳,刘虹,张浩,邵荣光.  药学学报. 2015(04)



本文编号：3266366