CD44v16调控乳腺癌细胞迁移及侵袭能力及其机制研究
发布时间：2021-07-05 22:34
目的本实验室前期研究发现乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR细胞株中存在一种新的CD44变异体（CD44v16）,可以明显增强乳腺癌的干性,并促进乳腺癌细胞对阿霉素的耐药。本研究旨在进一步探索CD44v16对乳腺癌细胞的增殖、侵袭及转移的影响及其机制研究,为乳腺癌的复发和转移的诊断和治疗提供理论依据。方法1.根据CD44v16的基因序列设计并合成质粒,通过慢病毒将其转染至乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231中以获得稳定过表达细胞系,细胞可分为以下几组:CD44v16过表达组,阴性对照（NC）组及空白对照（N）组。并通过荧光定量PCR技术以进一步验证过表达CD44v16及阴性对照组慢病毒颗粒转染成功后CD44v16的mRNA相对表达量。2.通过CCK8法及流式细胞仪技术检测过表达CD44v16后MCF-7细胞及MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的改变。3.通过细胞划痕法及Transwell侵袭试验检测CD44v16过表达后对MCF-7细胞及MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力的影响并进行相关机制研究。4.利用qRT-PCR及Western blot法检测各组细胞内侵袭相关基质金属蛋白...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒转染乳腺癌细胞后各组细胞内绿色荧光蛋白（GFP）的表达（x100）及转染后CD44v16的mRNA相对表达量注：A：荧光显微镜下观察MCF-7细胞转染慢病毒颗粒后GFP表达；B：MCF-7细胞转染后
CD44v16调控乳腺癌迁移及侵袭能力及机制研究18高于NC组细胞及N组细胞（P<0.01，见图2.2B）。图2.2CCK8法检测转染慢病毒颗粒后细胞增殖率注：A：MCF-7细胞在病毒转染后各时间段内细胞增殖率；B：MDA-MB-231细胞病毒转染后各时间段内细胞增殖率；**P<0.01，***P<0.001；Figure2.2EffectsoflentivirusinfectiononproliferationrateofbreastcancercellbyCCK-8assayNote:A:TheproliferationrateofMCF-7infectedwithlentivirusineachperiod;B:TheproliferationrateofMDA-MB-231infectedwithlentivirusineachperiod;**P<0.01，***P<0.001;2.3.3CD44v16过表达抑制乳腺癌细胞的凋亡流式细胞仪结果表明，MCF-7/CD44v16过表达组细胞的凋亡率明显低于NC组细胞及N组细胞（P<0.001，见图2.3A、B）。MDA-MB-231/CD44v16过表达组的细胞凋亡能力也同样明显低于NC组细胞及N组细胞（P<0.001，见图2.3C、D）。
江苏大学硕士学位论文19图2.3流式细胞仪检测乳腺癌细胞转染慢病毒颗粒后细胞凋亡能力注：A，B：MCF-7细胞病毒转染后细胞凋亡能力变化；C，D：MDA-MB-231细胞病毒转染后细胞凋亡能力变化；Figure2.3TheapoptoticabilityofbreastcancercellinfectedwithlentivirusbyflowcytometryNote:A,B:TheapoptoticabilityofMCF-7infectedwithlentivirus;C,D:TheapoptoticabilityofMDA-MB-231infectedwithlentivirus;***P<0.001;2.3.4CD44v16过表达调控乳腺癌细胞的迁移在细胞划痕处理后用无血清培养48h，结果显示MCF-7/CD44v16过表达组细胞迁移能力明显高于NC组细胞及N组细胞（P<0.001，见图2.4A，B）。与此同时，在MDA-MB-231/CD44v16过表达组细胞中的迁移能力同样明显高于NC组细胞及N组细胞（P<0.001，见图2.4C，D）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CD44v16通过细胞自噬途径增强乳腺癌MCF7细胞的化疗耐药性[J]. 钱傅燕雯,冯凡,许文林. 肿瘤. 2019(06)
本文编号：3266954
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒转染乳腺癌细胞后各组细胞内绿色荧光蛋白（GFP）的表达（x100）及转染后CD44v16的mRNA相对表达量注：A：荧光显微镜下观察MCF-7细胞转染慢病毒颗粒后GFP表达；B：MCF-7细胞转染后
CD44v16调控乳腺癌迁移及侵袭能力及机制研究18高于NC组细胞及N组细胞（P<0.01，见图2.2B）。图2.2CCK8法检测转染慢病毒颗粒后细胞增殖率注：A：MCF-7细胞在病毒转染后各时间段内细胞增殖率；B：MDA-MB-231细胞病毒转染后各时间段内细胞增殖率；**P<0.01，***P<0.001；Figure2.2EffectsoflentivirusinfectiononproliferationrateofbreastcancercellbyCCK-8assayNote:A:TheproliferationrateofMCF-7infectedwithlentivirusineachperiod;B:TheproliferationrateofMDA-MB-231infectedwithlentivirusineachperiod;**P<0.01，***P<0.001;2.3.3CD44v16过表达抑制乳腺癌细胞的凋亡流式细胞仪结果表明，MCF-7/CD44v16过表达组细胞的凋亡率明显低于NC组细胞及N组细胞（P<0.001，见图2.3A、B）。MDA-MB-231/CD44v16过表达组的细胞凋亡能力也同样明显低于NC组细胞及N组细胞（P<0.001，见图2.3C、D）。
江苏大学硕士学位论文19图2.3流式细胞仪检测乳腺癌细胞转染慢病毒颗粒后细胞凋亡能力注：A，B：MCF-7细胞病毒转染后细胞凋亡能力变化；C，D：MDA-MB-231细胞病毒转染后细胞凋亡能力变化；Figure2.3TheapoptoticabilityofbreastcancercellinfectedwithlentivirusbyflowcytometryNote:A,B:TheapoptoticabilityofMCF-7infectedwithlentivirus;C,D:TheapoptoticabilityofMDA-MB-231infectedwithlentivirus;***P<0.001;2.3.4CD44v16过表达调控乳腺癌细胞的迁移在细胞划痕处理后用无血清培养48h，结果显示MCF-7/CD44v16过表达组细胞迁移能力明显高于NC组细胞及N组细胞（P<0.001，见图2.4A，B）。与此同时，在MDA-MB-231/CD44v16过表达组细胞中的迁移能力同样明显高于NC组细胞及N组细胞（P<0.001，见图2.4C，D）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]CD44v16通过细胞自噬途径增强乳腺癌MCF7细胞的化疗耐药性[J]. 钱傅燕雯,冯凡,许文林. 肿瘤. 2019(06)
本文编号：3266954
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