MAP2K4在乳腺癌中的表达、功能及分子机制的初步研究
发布时间：2021-07-13 06:09
背景:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,乳腺癌属于乳腺腺上皮组织的异质性疾病,其发生与年龄、雌激素、家族史、基因易感性等因素有关。目前,研究发现众多基因突变和异常表达参与乳腺癌的发生与发展过程。因此,探讨与乳腺癌相关的基因表达,功能及其机制研究,将会进一步揭示乳腺癌的发病机制和为防治乳腺癌发生与发展提供新的靶点。MAP2K4是丝裂原活化蛋白激酶激活剂家族的成员之一,信号级联反应激活MAP2K4,随后MAP2K4磷酸化而激活下游的分子JNK和P38,从而调控细胞免疫、增殖等过程,但其在乳腺癌中的作用及分子机制尚无报道。本文将着重探讨MAP2K4与乳腺癌相关的基因表达,功能及其机制研究,将会进一步揭示乳腺癌的发病机制和为防治乳腺癌发生与发展提供新的靶点。研究内容和方法1、MAP2K4在乳腺癌中的功能研究（1）使用慢病毒载体在MCF-7、A231细胞株中稳定过表达MAP2K4,用实时荧光定量PCR检测其过表达倍数及用Western Blot检测其在蛋白水平表达量;（2）乳腺癌细胞稳定过表达MAP2K4后,利用MTT实验、流式细胞术、Edu实验以及裸鼠原位皮下成瘤实验检测MCF-7和A231细...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１慢病毒感染后发绿色荧光的乳腺癌细胞株（ＬＥＶ为感染空载对照慢病毒的细胞，??
??图１－３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测－ＭＡＰ２Ｋ４的蛋白水平表达??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＭＡＰ２Ｋ４?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??４．成功过表达ＭＡＰ２Ｋ４的乳腺癌细胞所表现出的体外功能变化??（１）?ＭＴＴ实验结果??利用细胞增殖ＭＴＴ实验检测过表达ＭＡＰ２Ｋ４与对照组在七天内对乳腺癌??细胞的增值情况影响。将七天检测的所有０Ｄ值汇总后绘制出折线图。从折线图??中可以明显地看出，相比于对照ＮＣ组，过表达ＭＡＰ２Ｋ４的乳腺癌细胞促进乳??腺癌细胞增殖。采用析因设计的方差分析对数据进行统计分析，结果显示，从??细胞增殖的第四天开始，０Ｄ值相比于对照组有统计学上的差异（Ｐ＜０．０５）。因??此，ＭＡＰ２Ｋ４在体外能够促进乳腺癌细胞的增殖（见图１－４）。??＋?２３１?ＮＣ??＋?ＭＣＦ－７ＭＡＰ２Ｋ４?３?＋?２３１?ＭＡＰ２Ｋ４??ｏｎ?－ｍ－?ＭＣＦ－７ＮＣ?＊??ｏ．ｏ－ｉ￣ｒ—ｉ￣ｉ￣ｉ￣ｉ￣￣ｉ￣ｉ?￣ｉ￣ｉ￣ｉ￣；￣￣Ｉ￣ｉ￣ｉ￣？??０?１?２?３?４?５?６?７?８?０１２３４５６７８??Ｄａｙｓ?Ｄａｙｓ??图１－４?ＬＶ－ＭＡＰ２Ｋ４及对照组细胞的体外生长情况??Ｆｉｇ．?１－４?Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＶ－ＭＡＰ２Ｋ４?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｃｅｌｌ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??（２）?Ｅｄｕ实验结果??Ｅｄｕ实验检测稳定过表达ＭＡＰ２Ｋ４后对乳腺癌细胞周期变化的影响（图??１－５）
ＭＣＦ－７和Ａ２３１细胞迁移和侵袭的影响。与对照组相比，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验结果（图??１－７Ａ）显示过表达ＭＡＰ２Ｋ４的实验组穿过膜的细胞数明显比对照组多（Ｐ＜〇．０５），??细胞运动能力增强。Ｂｏｙｄｅｎ实验（图１－７Ｂ）也得到类似的结果，同样的时间点??发现过表达ＭＡＰ２Ｋ４对乳腺癌细胞ＭＣＦ－７和Ａ２３１细胞迁移的能力强。我们进??行３次独立实验和统计学ｔ检验分析差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。因此，我??们可以得出结论：ＭＡＰ２Ｋ４能够在体外促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力。??Ａ?Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ??ＭＣＦ－７?Ａ－２３１??．＊?－?．?，＼?＇?□?ＮＣ??Ｆ?？?＊？?、?＊？?？?－?％?口?ＭＡＰ２Ｋ４??？?－?－．＇Ｖ?？、?．?？＊．??ＮＣ?．?１〇〇ｌ?ｉ??■ｆ?＂?？?．?＇ｉ?＞?＊?ｓｏ－?Ｔ??ｉｓ，－?－?－?ｓ?ｒ－Ｈ??，?．；＊：?＊?？？？？?＾?ｆ?Ｒｎ??＇?，ｉ?４〇－?ｒ＾ｉ??ＭＡＰ２Ｋ４ｔ；，?；?；；?＾?＾?＼?Ｓ?－??卜１“?二？，?Ｊ?１Ｊ￣——￣Ｕ￣Ｉ—??＿?－?＾?Ｖ－＊＊：?：｝?ＭＣＦ．７?２３１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞增殖周期的调控及其抗调控因子抗体在肿瘤病理学研究中的应用[J]. 卢德宏,董彬,徐庆中. 诊断病理学杂志. 1996(01)
本文编号：3281511
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１慢病毒感染后发绿色荧光的乳腺癌细胞株（ＬＥＶ为感染空载对照慢病毒的细胞，??
??图１－３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测－ＭＡＰ２Ｋ４的蛋白水平表达??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＭＡＰ２Ｋ４?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??４．成功过表达ＭＡＰ２Ｋ４的乳腺癌细胞所表现出的体外功能变化??（１）?ＭＴＴ实验结果??利用细胞增殖ＭＴＴ实验检测过表达ＭＡＰ２Ｋ４与对照组在七天内对乳腺癌??细胞的增值情况影响。将七天检测的所有０Ｄ值汇总后绘制出折线图。从折线图??中可以明显地看出，相比于对照ＮＣ组，过表达ＭＡＰ２Ｋ４的乳腺癌细胞促进乳??腺癌细胞增殖。采用析因设计的方差分析对数据进行统计分析，结果显示，从??细胞增殖的第四天开始，０Ｄ值相比于对照组有统计学上的差异（Ｐ＜０．０５）。因??此，ＭＡＰ２Ｋ４在体外能够促进乳腺癌细胞的增殖（见图１－４）。??＋?２３１?ＮＣ??＋?ＭＣＦ－７ＭＡＰ２Ｋ４?３?＋?２３１?ＭＡＰ２Ｋ４??ｏｎ?－ｍ－?ＭＣＦ－７ＮＣ?＊??ｏ．ｏ－ｉ￣ｒ—ｉ￣ｉ￣ｉ￣ｉ￣￣ｉ￣ｉ?￣ｉ￣ｉ￣ｉ￣；￣￣Ｉ￣ｉ￣ｉ￣？??０?１?２?３?４?５?６?７?８?０１２３４５６７８??Ｄａｙｓ?Ｄａｙｓ??图１－４?ＬＶ－ＭＡＰ２Ｋ４及对照组细胞的体外生长情况??Ｆｉｇ．?１－４?Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＬＶ－ＭＡＰ２Ｋ４?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｃｅｌｌ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??（２）?Ｅｄｕ实验结果??Ｅｄｕ实验检测稳定过表达ＭＡＰ２Ｋ４后对乳腺癌细胞周期变化的影响（图??１－５）
ＭＣＦ－７和Ａ２３１细胞迁移和侵袭的影响。与对照组相比，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验结果（图??１－７Ａ）显示过表达ＭＡＰ２Ｋ４的实验组穿过膜的细胞数明显比对照组多（Ｐ＜〇．０５），??细胞运动能力增强。Ｂｏｙｄｅｎ实验（图１－７Ｂ）也得到类似的结果，同样的时间点??发现过表达ＭＡＰ２Ｋ４对乳腺癌细胞ＭＣＦ－７和Ａ２３１细胞迁移的能力强。我们进??行３次独立实验和统计学ｔ检验分析差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。因此，我??们可以得出结论：ＭＡＰ２Ｋ４能够在体外促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力。??Ａ?Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ??ＭＣＦ－７?Ａ－２３１??．＊?－?．?，＼?＇?□?ＮＣ??Ｆ?？?＊？?、?＊？?？?－?％?口?ＭＡＰ２Ｋ４??？?－?－．＇Ｖ?？、?．?？＊．??ＮＣ?．?１〇〇ｌ?ｉ??■ｆ?＂?？?．?＇ｉ?＞?＊?ｓｏ－?Ｔ??ｉｓ，－?－?－?ｓ?ｒ－Ｈ??，?．；＊：?＊?？？？？?＾?ｆ?Ｒｎ??＇?，ｉ?４〇－?ｒ＾ｉ??ＭＡＰ２Ｋ４ｔ；，?；?；；?＾?＾?＼?Ｓ?－??卜１“?二？，?Ｊ?１Ｊ￣——￣Ｕ￣Ｉ—??＿?－?＾?Ｖ－＊＊：?：｝?ＭＣＦ．７?２３１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞增殖周期的调控及其抗调控因子抗体在肿瘤病理学研究中的应用[J]. 卢德宏,董彬,徐庆中. 诊断病理学杂志. 1996(01)
本文编号：3281511
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