一种新型重组疫苗pNb的抗黑色素瘤效果研究
发布时间：2021-07-16 18:37
背景恶性肿瘤在我国居民死因中占第二位,仅次于心脏病。恶性肿瘤显著降低病人生存期并给病人带来巨大经济负担,人们对其格外重视。对于恶性肿瘤有许多治疗策略,其中疫苗治疗是现今研究热点。疫苗治疗相比传统治疗（手术治疗、放疗、化疗）最为重要的优势是其激发的免疫应答在体内长期发挥作用从而最大限度的避免肿瘤复发。NY-ESO-1作为众多肿瘤疫苗靶点中的一位,因其在多种肿瘤组织中特异性表达、表达水平较高而成为有前景的肿瘤疫苗靶点。NY-ESO-1联合各种佐剂制备肿瘤疫苗在动物实验中表现出优秀的抗肿瘤效果。此外,NY-ESO-1靶点疫苗在clinicaltrials.gov网站可见众多临床研究。已完成的有NY-ESO-1疫苗联合伊匹单抗用于治疗黑色素瘤的Ⅰ期临床试验,使用瑞喹莫德佐剂的NY-ESO-1疫苗用于治疗肿瘤的Ⅰ期临床试验。这些临床试验结果显示NY-ESO-1疫苗对于肿瘤病人有一定的有效率。此外,抗肿瘤的另一策略是抑制肿瘤血管新生,这是因为人们在较早的研究中已经认识到血管新生对于肿瘤的重要性。在没有血管新生的情况下肿瘤甚至长不到直径2mm大小。成纤维细胞生长因子（bFGF）作为第一个被鉴定的血管...
【文章来源】：河南大学河南省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒的PCR验证；1、2代表一种重组质粒的两个克隆；碱裂解法提取质粒后PCR
2 实验结果咪唑梯度洗脱时均未出现洗脱峰，只有最终 500 mM 咪唑洗脱时出现蛋白峰，此时收集洗脱液。过镍柱后 SDS-PAGE 电泳上柱前原液、流穿液、500 mM 咪唑洗脱液，考马斯亮蓝染色结果显示 500 mM 咪唑洗脱液有足够纯度的 pN 蛋白（图 2-1b）。pN 蛋白经透析和超滤后-80℃保存留待制备疫苗。
图 2-2 pb 蛋白的纯化；a：pb 蛋白在 20℃下诱导表达的结果，1：Marker，2：诱导前，3：诱导后总4：诱导后上清，5：诱导后沉淀；b：pb 蛋白 8 M 尿素变性，1：诱导前，2：诱导后上清，3：诱导后沉淀 8 M 尿素变性所得上清。2.2.3 pNb 蛋白的纯化pNb 蛋白在 37℃诱导时主要以包涵体形式存在（图 1-2c），降低温度也不能改变此情况，根据 20℃诱导时 pNb 蛋白的表达（图 2-3a）情况认为没有再优化温度的必要。同样地 pNb 蛋白经超声裂菌、3 M 尿素洗涤和 8 M 尿素变性最终得变性蛋白。将变性的pNb 蛋白上镍柱纯化，根据纯化结果（2-3b）认为须进一步纯化。挑选第 5 和第 6 管洗脱液进行阴离子柱纯化，结果显示离子纯化后 pNb 蛋白在流穿液中达到足够的纯度（2-3c）。需要说明的是阴离子柱对蛋白带电性有严格的要求，透析及过阴离子柱所用各溶液 pH 均为 9.5。纯化完成后把 pNb 蛋白超滤，然后-80℃保存备用。
本文编号：3287543
【文章来源】：河南大学河南省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒的PCR验证；1、2代表一种重组质粒的两个克隆；碱裂解法提取质粒后PCR
2 实验结果咪唑梯度洗脱时均未出现洗脱峰，只有最终 500 mM 咪唑洗脱时出现蛋白峰，此时收集洗脱液。过镍柱后 SDS-PAGE 电泳上柱前原液、流穿液、500 mM 咪唑洗脱液，考马斯亮蓝染色结果显示 500 mM 咪唑洗脱液有足够纯度的 pN 蛋白（图 2-1b）。pN 蛋白经透析和超滤后-80℃保存留待制备疫苗。
图 2-2 pb 蛋白的纯化；a：pb 蛋白在 20℃下诱导表达的结果，1：Marker，2：诱导前，3：诱导后总4：诱导后上清，5：诱导后沉淀；b：pb 蛋白 8 M 尿素变性，1：诱导前，2：诱导后上清，3：诱导后沉淀 8 M 尿素变性所得上清。2.2.3 pNb 蛋白的纯化pNb 蛋白在 37℃诱导时主要以包涵体形式存在（图 1-2c），降低温度也不能改变此情况，根据 20℃诱导时 pNb 蛋白的表达（图 2-3a）情况认为没有再优化温度的必要。同样地 pNb 蛋白经超声裂菌、3 M 尿素洗涤和 8 M 尿素变性最终得变性蛋白。将变性的pNb 蛋白上镍柱纯化，根据纯化结果（2-3b）认为须进一步纯化。挑选第 5 和第 6 管洗脱液进行阴离子柱纯化，结果显示离子纯化后 pNb 蛋白在流穿液中达到足够的纯度（2-3c）。需要说明的是阴离子柱对蛋白带电性有严格的要求，透析及过阴离子柱所用各溶液 pH 均为 9.5。纯化完成后把 pNb 蛋白超滤，然后-80℃保存备用。
本文编号：3287543
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