SIRT1对食管癌耐药细胞自噬及EMT的调控作用及机制研究
发布时间：2021-07-21 20:13
目的1.考察食管癌细胞耐药之后自噬水平的变化,以及自噬与细胞上皮间质转化（Epithelial Mesenchymal Transformation,EMT）之间的关系,探究食管癌耐药以及其诱发转移的新机制。2.探究SIRT1对食管癌耐药细胞自噬和EMT的调控。3.考察SIRT1抑制剂对体内肿瘤生长的影响,确证体内相关机制。方法1.采用MTT法检测食管癌耐药细胞TE-1/PTX、EC109/PTX的耐药指数;通过形态学观察的方法比较食管癌亲本细胞与耐药细胞的形态学差异。2.利用透射电子显微镜观察食管癌细胞耐药后自噬小体及自噬溶酶体数量的变化;采用Western Blotting和免疫荧光实验考察食管癌细胞耐药后自噬相关蛋白表达的变化。探究食管癌细胞耐药后自噬水平的变化。3.通过划痕、Transwell实验检测细胞耐药后迁移能力的变化;采用划痕、Transwell、Western Blotting、免疫荧光实验考察自噬抑制剂对食管癌耐药细胞迁移能力以及EMT相关蛋白的影响。探究食管癌细胞耐药后自噬和EMT的关系。4.通过SIRT1抑制剂和SIRT1 siRNA干预两种方式干扰SIRT1表...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１自嗤通路不意图??近年来，研究表明自噬在不同的癌症、不同的发生时期发挥的作用也??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]晚期食管癌免疫治疗药物及临床试验进展[J]. 冷雪峰,罗启余,韩泳涛. 中国胸心血管外科临床杂志. 2020(07)
[2]胰腺癌细胞吉西他滨耐药机制研究进展[J]. 刘成裕,刘广宣. 人民军医. 2019(12)
[3]食管癌病理特点及治疗预后的影响因素[J]. 田慧玲,田红艳. 全科口腔医学电子杂志. 2019(32)
[4]上皮间质转化与卵巢癌细胞顺铂耐药的相关研究[J]. 张为家,苏小岩,李爽,曾海. 重庆医学. 2019(13)
[5]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen. Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[6]食管癌的化疗新进展[J]. 吴成利,秦叔逵. 医师进修杂志. 2005(08)
硕士论文
[1]SIRT1的抑制剂EX527对耐药细胞侵袭转移的影响及机制研究[D]. 石晓丽.郑州大学 2018
[2]人食管鳞癌耐药模型的建立和JP抗耐药肿瘤作用研究[D]. 郭刘斌.郑州大学 2014
本文编号：3295697
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：101 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１自嗤通路不意图??近年来，研究表明自噬在不同的癌症、不同的发生时期发挥的作用也??
２２Ｘ?－?３．１８０７??Ｒ２１＝?０．９９７１参？？？＜??１５：．??ｉ?，？■??＾?Ｉ?Ｉ?Ｓ?Ｉ?＾?：?，１＊＊?？??｜１〇；——?Ｉ?Ｊ??择５?十＾＿＿－??ｆｆｉ?＇?．，？？？？？：丨?；?，ｉ??ｍ??〇?丨?－?Ｊ——＿．．．．．――一—．—??，．．．．．?；??—．．．．：?｜??ｋ?Ｏｉｌ?０ｉ２?０）３?ｄ４?０：５?〇ｊ６?０：７?０ｊ８?０．９?；??１?ｊ??ＯＤ值?［??图２．１蛋白定量标准曲线??（２）提取细胞总蛋白??收集生长状态良好的ＴＥ－１、ＥＣ１０９、ＴＥ－ｌ／ＰＴＸ、ＥＣ１０９／ＰＴＸ细胞，将??细胞接种于培养基中，加药组加入培养基稀释的氯喹，其终浓度为２０??阿ｏｌ／Ｌ。药物作用４８ｈ后，弃去培养基，胰酶消化收集不同样品组的细胞，??离心后，加入预冷的ＰＢＳ，洗涤两次，将细胞转移至１．５?ｍＬＥＰ管中，根据??收集的细胞的数量，加入不同体积的蛋白裂解液，混匀后，在涡旋仪上涡??旋３０?ｓ左右，使细胞被充分裂解。裂解完成后，将ＥＰ管放置在低温高速离??心机中离心，转速为１１０００?ｒｐｍ，时间是１０?ｍｉｎ，离心完成后吸取上清，并??转移至新的ＥＰ管中，记录所取上清体积。??（３）样品蛋白定量??具体操作如下：根据样品数量，按照每个样品设置三个复孔，Ａ液：Ｂ??液＝５０：?１的比例，计算并配制所需ＢＣＡ工作液的体积，混匀待用。在９６??孔板中分别加入１９?ｐＬＰＢＳ，１叫蛋白样品，２００?ｐＬＢＣＡ的工作液。完成后，??将９６孔板在３７°Ｃ的条件下孵育２０?ｍｉｎ，取出，在特定波长５６２?ｎｍ
?第二章食管癌细胞耐药后自噬与ＥＭＴ的变化及作用机制研究???的细胞活力。实验结果如图２．１所示：在同样的药物浓度下，与亲本细胞相??比，耐药细胞表现出更高的细胞活性。分别计算亲本食管癌细胞与耐药食??管癌细胞的ＩＣ５Ｇ，实验数据显示ＴＥ－１的半数抑制率（ＩＣ５Ｇ）为１１?ｎＭ，??ＴＥ－１／ＰＴＸ的半数抑制率（ＩＣ５〇）为９７ｎＭ，ＴＥ－１／ＰＴＸ的半数抑制率（ＩＣ５０）??是ＴＥ－１的８倍；ＥＣ１０９的半数抑制率（ＩＣ５〇）为６?ｎＭ，?ＥＣ１０９／ＰＴＸ的半数??抑制率（ＩＣ５〇）为７３?ｎＭ，ＥＣ１０９／ＰＴＸ的半数抑制率（ＩＣ５Ｇ）是ＥＣ１０９的??１２倍（表２．６）。实验数据表明食管癌耐药株细胞为中度耐药，可以用于后??续实验。??Ａ?Ｂ??１２〇－｜?＋?ＴＥ－１?１２０］?＋?ＥＣ１０９??〇?１〇°＂?＋?ＴＥ－１／ＰＴＸ?〇?１°°＾Ｓｓａ?＋?ＥＣ１０９／ＰＴＸ??１８〇－?＼?Ｓ８〇＇??￥?６０－?＼?ｔ?６〇＂?＼?＼??画￥?ｉ?Ｉ?－?Ｖ??〇?２０－?＇?令―－令?一＃一＿－节?〇?２０－?一￣？￣？??Ｏ?Ｏ??０?２?４?８?１６?３２?６４?１２８?２５６?５１２?１０２４?０?２?４?８?１６?３２?６４?１２８?２５６?５１２?１０２４??ＰＴＸ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｎｍｏｌ／Ｌ）?ＰＴＸ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｎｍｏｌ／Ｌ）??图２．１?ＭＴＴ实验检测不同浓度ＰＴＸ对食管癌亲本和耐药细胞的活力影响??表２．６食管癌细胞ＩＣ５Ｇ及耐药指数??Ｃｅｌｌ?Ｌｉｎｅｓ?ＩＣ５０?（Ｍｅａｎ?士?ＳＤ）?（ｎＭ）?Ｒｅｓ
【参考文献】：
期刊论文
[1]晚期食管癌免疫治疗药物及临床试验进展[J]. 冷雪峰,罗启余,韩泳涛. 中国胸心血管外科临床杂志. 2020(07)
[2]胰腺癌细胞吉西他滨耐药机制研究进展[J]. 刘成裕,刘广宣. 人民军医. 2019(12)
[3]食管癌病理特点及治疗预后的影响因素[J]. 田慧玲,田红艳. 全科口腔医学电子杂志. 2019(32)
[4]上皮间质转化与卵巢癌细胞顺铂耐药的相关研究[J]. 张为家,苏小岩,李爽,曾海. 重庆医学. 2019(13)
[5]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen. Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[6]食管癌的化疗新进展[J]. 吴成利,秦叔逵. 医师进修杂志. 2005(08)
硕士论文
[1]SIRT1的抑制剂EX527对耐药细胞侵袭转移的影响及机制研究[D]. 石晓丽.郑州大学 2018
[2]人食管鳞癌耐药模型的建立和JP抗耐药肿瘤作用研究[D]. 郭刘斌.郑州大学 2014
本文编号：3295697
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