抗CD20纳米抗体梳的构建及其抗淋巴瘤作用研究
发布时间：2021-07-23 19:36
[研究目的]：应用纳米技术,构建抗CD20纳米抗体梳,研究其对非霍奇金淋巴瘤细胞的体内外抗肿瘤作用及相关作用机制,为临床上提高非霍奇金淋巴瘤靶向治疗效果和解决利妥昔单抗的耐药问题提供新的思路和方法。[研究方法]：应用纳米技术,用分子量为70kDa聚乙烯亚胺（PEI）载体将两种不同类型的CD20抗体（Ⅰ型抗体利妥昔单抗,Ⅱ型抗体托西莫单抗）进行交联,构建梳状的CD20抗体纳米团簇,我们将其命名为抗CD20纳米抗体梳,标记为PPRT （PEI-Polymer-Rituximab-Tositumomab）。随后用动态光散射仪（DLS）比较PPRT纳米抗体梳和游离单克隆抗体的粒径大小,原子力显微镜（AFM）观察PPRT纳米抗体梳的显微形态,SDS-PAGE验证抗体与PEI载体的成功连接。体外实验中,分离新鲜人血清和人外周血淋巴瘤细胞（PBMC）作为补体和效应细胞的来源,分别与淋巴瘤细胞及抗体孵育后,比较游离CD20抗体和PPRT纳米抗体梳体外诱导淋巴瘤细胞的补体依赖的细胞毒作用（Complement Dependent Cytotoxicity, CDC）、抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（An...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－３：?ＰＰＲＴ纳米抗体梳与ＣＤ２０抗原的结合和解离能力（Ａ）?ＲＴＸ－４８８，?Ｔｏｓ－６４７和??ＰＰＲＴ－４８８／６４７与Ｒａｊｉ细胞解育后，激光共聚焦显微镜观察到的细胞表面的巧光分布情况（Ｂ－Ｃ）??
??内化－２巧光强度分布的变异系数（ｃｏｅ巧ｄｅｎｔ?ｏｆ?ｖａｒｉａｔｉｏｎ，?ＣＶ）。如图３－１Ｂ所示，经过化Ｓ??和ＰＰＲＴ处理后，民ａｊｉ细胞内ＦＬ２的变异系数产生了显著的变化（ＣＶｎｔ：?２８．１±２．５?ＶＳ??ＣＶｔｏｓ：?７５．４±２．７７，?ＣＶｐｐｒｔ?７２．６±３．０４）〇??ＢａｃｋｇｆｕｎｄｊＩ?品?ｉ?Ａ?品！：?Ｉ?Ｉ??，Ｊ?兮＇＂，？，?＂１?ｉＪ?＞?Ｉ?＂?ｊ’—ｒ?今??Ｃ?ＮＴ?民?ＴＸ?Ｔｏｓ?ＰＰＢ?ＰＰ?民Ｔ??ａＨＢＢＩＢ??图３－１：?ＰＰＲＴ纳米抗体梳诱导１？３＂细胞溶酶体改变（Ａ－Ｂ）流式细胞术检测ＰＰＲＴ处理后Ｒａｊｉ细胞??溶酶体探针染色巧光分布情况；（Ｃ）激光共聚焦显微镜观察ＰＰＲＴ处理后民却细胞溶酶体变化??Ｆ＾ｉｇｕｒｅ?３－１；?Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ?ｏｆ?ｌｙｓｏｓｏｍｅｓ?ｉｎ?ＰＰＲＴ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ．?（Ａ）?Ａｆｔｅｒ?也ｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｆ??ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ?ａｂｔｉｂｏｄｉｅｓ
ＰＰＲＴ纳米抗体梳处理后，肿瘤细胞胞浆内Ｃａ也ｅｐｓｉｎ?Ｂ蛋白含量的变化进行了定性检??现！Ｊ。Ｃａ出巧ｓｉｎ?Ｂ是一种蛋白质，在正常情况下存在于细胞的溶酶体内，细胞浆中含量??极少［１，２’１２］。如图３－２所示，ＲＴＸ和ＰＰＢ处理后，Ｒａｊ細胞胞浆内几乎观察不到明显的??绿色巧光（Ｃａ化ｅｐｓｉｎ?Ｂ）。而经过Ｔｏ沸ＰＰＲＴ处理后，胞浆内出现明显的弥散分布与整??个胞浆的绿色巧光，这表明，Ｔｏｓ和ＰＰＲＴ可ｙＵ秀导祀细胞溶酶体内容物的释放，这与??上述溶酶体探针染色后所观察到的结果相一致。??Ｔｂｓ?ＰＰＢ?ＰＰＲＴ??图３－２：激光共聚焦显微镜观察抗ＣＤ２０抗体和ＰＰＲＴ纳米抗体梳处理后细胞内Ｃａ化ｅｐｓ化Ｂ变化??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２：?Ｃｏｎｆｏｃａｌ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ?Ｂ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（ｇｒｅｅｎ）?ｉｎ?Ｒａｊｉ?ｃｅｌｌｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ??ＰＰＲＴ?ａｎｄ?ｆｒｅｅ?ｍＡｂｓ．?ＤＮＡ?ｗａｓ?ｃｏｕｎｔｅｒｓｔａｉｎｅｄ?ｗ祉ＩＤＡＰＩ?（ｂ山ｅ）．?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒ：?２５?ｆｘｍ．??（二）ＰＰＲＴ纳米抗体梳可通过＂细胞内交联＂成功激活帮细胞内??的Ｃａｓｐａｓｅ调亡通路??Ｃａ巧ａｓｅ?（Ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ?ａｓｐａｒｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｐｒｏ化ａｓｅ）家族是一组结构上相关的半脫氨酸??蛋白酶家族，其在细胞调亡的调节和执行过程中具有重要的地位ｆＷ。Ｃａｓｐａｓｅ可通过??Ｗ下两条途径激活：（１）外源性激活途径：Ｆａｓ与其配体结合后
【参考文献】：
期刊论文
[1]凋亡小体与炎症小体:Caspase蛋白酶的激活平台[J]. 柴继杰,施一公. 生物化学与生物物理进展. 2014(10)
[2]非霍奇金淋巴瘤的临床研究进展[J]. 周立强. 癌症进展. 2003(Z1)
硕士论文
[1]Rituximab单点突变体H102YK抗肿瘤作用及机制研究[D]. 李华飞.第二军医大学 2012
本文编号：3299904
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－３：?ＰＰＲＴ纳米抗体梳与ＣＤ２０抗原的结合和解离能力（Ａ）?ＲＴＸ－４８８，?Ｔｏｓ－６４７和??ＰＰＲＴ－４８８／６４７与Ｒａｊｉ细胞解育后，激光共聚焦显微镜观察到的细胞表面的巧光分布情况（Ｂ－Ｃ）??
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ＰＰＲＴ纳米抗体梳处理后，肿瘤细胞胞浆内Ｃａ也ｅｐｓｉｎ?Ｂ蛋白含量的变化进行了定性检??现！Ｊ。Ｃａ出巧ｓｉｎ?Ｂ是一种蛋白质，在正常情况下存在于细胞的溶酶体内，细胞浆中含量??极少［１，２’１２］。如图３－２所示，ＲＴＸ和ＰＰＢ处理后，Ｒａｊ細胞胞浆内几乎观察不到明显的??绿色巧光（Ｃａ化ｅｐｓｉｎ?Ｂ）。而经过Ｔｏ沸ＰＰＲＴ处理后，胞浆内出现明显的弥散分布与整??个胞浆的绿色巧光，这表明，Ｔｏｓ和ＰＰＲＴ可ｙＵ秀导祀细胞溶酶体内容物的释放，这与??上述溶酶体探针染色后所观察到的结果相一致。??Ｔｂｓ?ＰＰＢ?ＰＰＲＴ??图３－２：激光共聚焦显微镜观察抗ＣＤ２０抗体和ＰＰＲＴ纳米抗体梳处理后细胞内Ｃａ化ｅｐｓ化Ｂ变化??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２：?Ｃｏｎｆｏｃａｌ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ?Ｂ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（ｇｒｅｅｎ）?ｉｎ?Ｒａｊｉ?ｃｅｌｌｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ??ＰＰＲＴ?ａｎｄ?ｆｒｅｅ?ｍＡｂｓ．?ＤＮＡ?ｗａｓ?ｃｏｕｎｔｅｒｓｔａｉｎｅｄ?ｗ祉ＩＤＡＰＩ?（ｂ山ｅ）．?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒ：?２５?ｆｘｍ．??（二）ＰＰＲＴ纳米抗体梳可通过＂细胞内交联＂成功激活帮细胞内??的Ｃａｓｐａｓｅ调亡通路??Ｃａ巧ａｓｅ?（Ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ?ａｓｐａｒｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｐｒｏ化ａｓｅ）家族是一组结构上相关的半脫氨酸??蛋白酶家族，其在细胞调亡的调节和执行过程中具有重要的地位ｆＷ。Ｃａｓｐａｓｅ可通过??Ｗ下两条途径激活：（１）外源性激活途径：Ｆａｓ与其配体结合后
【参考文献】：
期刊论文
[1]凋亡小体与炎症小体:Caspase蛋白酶的激活平台[J]. 柴继杰,施一公. 生物化学与生物物理进展. 2014(10)
[2]非霍奇金淋巴瘤的临床研究进展[J]. 周立强. 癌症进展. 2003(Z1)
硕士论文
[1]Rituximab单点突变体H102YK抗肿瘤作用及机制研究[D]. 李华飞.第二军医大学 2012
本文编号：3299904
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