自分泌IGF-1/IGF-1R环路在NK/TCL中的表达及其对肿瘤迀移和侵袭的调控
发布时间：2021-07-26 14:49
目的:检测IGF-1/IGF-1R自分泌环路在NK/T细胞淋巴瘤（NK/TCL）细胞株中的表达,探讨IGF-1/IGF-1R信号通路对NK/TCL细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法:利用RT-PCR及免疫荧光技术检测IGF-1/IGF-1R的表达,蛋白印迹技术检测IGF-1R及其下游通路激酶ERK1/2、AKT、JNK、p38的磷酸化水平,transwell技术观察IGF-1/IGF-1R自分泌环路及下游信号通路对细胞迁移和侵袭能力的影响。ELISA法检测IGF-1/IGF-1R自分泌环对细胞MMP-2、MMP-9、TIMP1分泌水平的影响。结果:本实验所用三株NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6和SNT-8中,前两者共表达IGF-1/IGF-1R,其共表达特征具有肿瘤特异性,而SNT-8缺乏IGF-1R表达无法形成自分泌环路。自分泌的IGF-1可引起其受体相关的酪氨酸激酶活化进而激活其下游AKT及ERK1/2信号传导,AKT通路的活化可显著影响细胞迁移及侵袭能力,同时IGF-1R可通过调控MMP-2、MMP-9的分泌增强肿瘤细胞基质降解能力,促进侵袭。小分子IGF-1R抑制剂可通过...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-PCR检测IGF-1及IGF-1R基因在NK/TCL中的表达Fig1.1ExpressionofIGF-1andIGF-1RmRNAsinNK/TCLcellsbyRT-PCRassay
图 1.2 IGF-1/IGF-1R 在 NK/TCL 细胞株中的表达Fig 1.2 Detection of IGF-1 and IGF-1R protein in NK/TCL cell lines.2．IGF-1/IGF-1R 自分泌环路具有信号转导活性2.1 自分泌性 IGF-1 可诱导 IGF-1R 磷酸化为明确 NK/TCL 细胞中自分泌性 IGF-1 能否诱导 IGF-1R 磷酸化，我们利用蛋白质免疫印迹检测 IGF-1R 磷酸化水平。在未予任何外源性药物的情况下，表达 IGF-1R 的细胞株 SNK-1、SNK-6 均存在受体基础水平磷酸化。暴露于外源性IGF-1（250ng/mL）后 15 分钟，磷酸化的 IGF-1R 较基础状态显著升高。而分别给予 IGF-1R 选择性抑制剂 OSI-906（1μ M）和 GSK1904529A(1μ M)后，基础状态及再加入外源 IGF-1 刺激后的 IGF-1R 磷酸化水平均受显著抑制。蛋白印迹试
图 2.1 蛋白免疫印迹技术检测 IGF-1R 及 p-IGF-1R 蛋白Fig 2.1 Detection of IGF-1R and p-IGF-1R protein by Western blot.外源性 IGF-1：250 ng/mL。OSI-906：1 μM。GSK1904529A：1 μM。IGF-1R：细胞经各种条件处理后样本总 IGF-1R 的表达水平。p-IGF-1R: 磷酸化的 IGF-1R 表达水平。2.2 IGFR 下游通路的磷酸化我们进一步观察自分泌 IGF-1 引起 IGF-1R 磷酸化后对受体后信号通路活性的影响。在上述同样的处理条件下，利用蛋白质免疫印迹技术，进行AKT、ERK1/2、p38 及 JNK 总蛋白及磷酸化蛋白的检测。结果显示上述四种蛋白均存在基础状态磷酸化， SNK-1、SNK-6 细胞株中 ERK1/2 和 AKT（473 位点）经外源性 IGF-1刺激后可出现明显活化，且 IGF-1R 抑制剂 OSI-906（1μ M）和 GSK1904529A(1
【参考文献】：
期刊论文
[1]自分泌VEGF/VEGFR环路在NK/TCL中的表达及其对肿瘤迁移和侵袭的调控[J]. 董一文,金震,丁浩,常君,张文皓,李清,曹祥山,王立峰,陶荣. 临床血液学杂志. 2014(03)
本文编号：3303769
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-PCR检测IGF-1及IGF-1R基因在NK/TCL中的表达Fig1.1ExpressionofIGF-1andIGF-1RmRNAsinNK/TCLcellsbyRT-PCRassay
图 1.2 IGF-1/IGF-1R 在 NK/TCL 细胞株中的表达Fig 1.2 Detection of IGF-1 and IGF-1R protein in NK/TCL cell lines.2．IGF-1/IGF-1R 自分泌环路具有信号转导活性2.1 自分泌性 IGF-1 可诱导 IGF-1R 磷酸化为明确 NK/TCL 细胞中自分泌性 IGF-1 能否诱导 IGF-1R 磷酸化，我们利用蛋白质免疫印迹检测 IGF-1R 磷酸化水平。在未予任何外源性药物的情况下，表达 IGF-1R 的细胞株 SNK-1、SNK-6 均存在受体基础水平磷酸化。暴露于外源性IGF-1（250ng/mL）后 15 分钟，磷酸化的 IGF-1R 较基础状态显著升高。而分别给予 IGF-1R 选择性抑制剂 OSI-906（1μ M）和 GSK1904529A(1μ M)后，基础状态及再加入外源 IGF-1 刺激后的 IGF-1R 磷酸化水平均受显著抑制。蛋白印迹试
图 2.1 蛋白免疫印迹技术检测 IGF-1R 及 p-IGF-1R 蛋白Fig 2.1 Detection of IGF-1R and p-IGF-1R protein by Western blot.外源性 IGF-1：250 ng/mL。OSI-906：1 μM。GSK1904529A：1 μM。IGF-1R：细胞经各种条件处理后样本总 IGF-1R 的表达水平。p-IGF-1R: 磷酸化的 IGF-1R 表达水平。2.2 IGFR 下游通路的磷酸化我们进一步观察自分泌 IGF-1 引起 IGF-1R 磷酸化后对受体后信号通路活性的影响。在上述同样的处理条件下，利用蛋白质免疫印迹技术，进行AKT、ERK1/2、p38 及 JNK 总蛋白及磷酸化蛋白的检测。结果显示上述四种蛋白均存在基础状态磷酸化， SNK-1、SNK-6 细胞株中 ERK1/2 和 AKT（473 位点）经外源性 IGF-1刺激后可出现明显活化，且 IGF-1R 抑制剂 OSI-906（1μ M）和 GSK1904529A(1
【参考文献】：
期刊论文
[1]自分泌VEGF/VEGFR环路在NK/TCL中的表达及其对肿瘤迁移和侵袭的调控[J]. 董一文,金震,丁浩,常君,张文皓,李清,曹祥山,王立峰,陶荣. 临床血液学杂志. 2014(03)
本文编号：3303769
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