ESM1在三阴性乳腺癌细胞增殖及侵袭中的作用及机制研究
发布时间：2021-07-29 18:08
全世界癌症发病率和死亡率正在急速增加中,在女性中,乳腺癌是最常诊断出的癌症,是女性中与肿瘤相关死亡的主要因素。三阴性乳腺癌是指HER-2、PR和ER蛋白均为阴性的乳腺癌,占全部乳腺癌的10%-20%。三阴性乳腺癌与其他亚型乳腺癌相比具有生存率低、恶性化水平更高、易于复发、产生耐药、发生转移和发病年轻化等特点,加之TNBC缺乏在其他类型的乳腺肿瘤中表达的可靶向受体,因此治疗这种高度侵袭性乳腺癌极具有挑战性。内皮细胞特异性分子1（ESM1）是一种可在血液中自由循环的硫酸皮肤蛋白多糖。现有研究发现,ESM1在肺癌、子宫癌、肾癌、肝癌、脑胶质母细胞瘤、乳腺癌等肿瘤中明显高表达,并且已有证据表明ESM1直接参与肿瘤进展,对头颈部癌、胃癌、鼻咽癌、大肠癌和肝癌细胞的增殖和迁移有显著影响。最近研究结果显示,ESM1可作为三阴性乳腺癌预后标志物。因而探究ESM1在三阴性乳腺癌中的作用及机制具有重要意义。本研究旨在探讨ESM1在三阴性乳腺癌中增殖、迁移以及侵袭作用和其潜在的机制。我们应用人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468,构建稳定敲低的ESM1细胞系和瞬时过表达ESM1,应用...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
ESM1在乳腺癌不同癌症阶段以及不同亚型中的表达；TCGA数据库中表达高或低ESM1水平的TNBC患者的无复发生存期（RFS）的Kaplan-Meier曲线
华中农业大学2017届硕士研究生学位（毕业）论文28MDA-MB-231中稳定敲低内皮细胞特异性分子-1，我们构建了pGreenPuro-shESM1载体和pGreenPuro对照空载体，pGreenPuro-ESM1shRNA和pGreenPuro-Control质粒被VSV-G和GAG-POL质粒包埋并感染293T细胞，并收集病毒液感染MDA-MB-231细胞，2ug/ml终浓度嘌呤霉素持续筛选三天，扩增存活细胞并分析ESM1mRNA表达和蛋白质表达，如图2A和2B所示。通过荧光定量PCR和westernblot检测，三个shRNA都能显著抑制ESM1的表达。最终我们选择了敲低效率最高的shRNA1序列（图2C），并用于进一步实验。图3-2实时荧光定量PCR和蛋白质印记检测ESM1敲低效率和过表达效A-B，通过蛋白质印迹和qRT-PCR检查了ESM1的shRNA在MDA-MB-231细胞中的敲低效率；C，通过westernblot验证ESM1敲低效率。D，通过westernblot检查ESM1过表达的作用。Fig3-2Real-timePCRandwesternblottocheckESM1knockdownefficiencyandoverexpressionefficiencyA-B,EffectsofshRNAknockdownofESM1onMDA-MB-231werecheckedbywesternblotandqRT-PCR;
华中农业大学2017届硕士研究生学位（毕业）论文30图3-3敲低ESM1抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭以及克隆形成。A，CCK8检测细胞增殖能力变化；B，平板克隆形成实验C，Transwell检测细胞迁移能力；D，Transwell检测细胞侵袭能力Fig.3-3ESM1knockdowndecreasescellproliferation,migration,invasionandcolonyformationonMDA-MB-231.A,CCK8detectsCellproliferationassay;B,Colonyformationassay.C,TranswelldetectsCellmigrationassay;D,TranswelldetectsCellinvasionassay;3.4shESM1抑制MDA-MB-468细胞增殖、迁移和侵袭MDA-MB-468细胞和MDA-MB-231细胞一样同为三阴性乳腺癌细胞，不同的是，MDA-MB-231细胞是高度侵袭的细胞，MDA-MB-468是中度侵袭的细胞。此前我们成功证明了shESM1抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭。为了进一步探索ESM1在三阴性乳腺癌中的作用，我们选择了三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞并成功构建了稳定敲低的shESM3细胞系。（图4A）。然后，使用MDA-MB-468ESM1敲低细胞和对照组细胞来检查细胞增殖，迁移和侵袭的能力（图4B-4C）。就如同在MDA-MB-231的结果一样，当在MDA-MB-468细胞中用shRNA敲低ESM1时，明显看到MDA-MB-468细胞在体外的增殖，
【参考文献】：
期刊论文
[1]Interleukin-8 associates with adhesion,migration,invasion and chemosensitivity of human gastric cancer cells[J]. Wen-Xia Kuai,Department of Pediatrics,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China Qiong Wang,Xiao-Zhong Yang,Department of Digestion,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China Yao Zhao,Ren Yu,Xiao-Jun Tang,Department of Gastrointestinal Surgery,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2012(09)
本文编号：3309803
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
ESM1在乳腺癌不同癌症阶段以及不同亚型中的表达；TCGA数据库中表达高或低ESM1水平的TNBC患者的无复发生存期（RFS）的Kaplan-Meier曲线
华中农业大学2017届硕士研究生学位（毕业）论文28MDA-MB-231中稳定敲低内皮细胞特异性分子-1，我们构建了pGreenPuro-shESM1载体和pGreenPuro对照空载体，pGreenPuro-ESM1shRNA和pGreenPuro-Control质粒被VSV-G和GAG-POL质粒包埋并感染293T细胞，并收集病毒液感染MDA-MB-231细胞，2ug/ml终浓度嘌呤霉素持续筛选三天，扩增存活细胞并分析ESM1mRNA表达和蛋白质表达，如图2A和2B所示。通过荧光定量PCR和westernblot检测，三个shRNA都能显著抑制ESM1的表达。最终我们选择了敲低效率最高的shRNA1序列（图2C），并用于进一步实验。图3-2实时荧光定量PCR和蛋白质印记检测ESM1敲低效率和过表达效A-B，通过蛋白质印迹和qRT-PCR检查了ESM1的shRNA在MDA-MB-231细胞中的敲低效率；C，通过westernblot验证ESM1敲低效率。D，通过westernblot检查ESM1过表达的作用。Fig3-2Real-timePCRandwesternblottocheckESM1knockdownefficiencyandoverexpressionefficiencyA-B,EffectsofshRNAknockdownofESM1onMDA-MB-231werecheckedbywesternblotandqRT-PCR;
华中农业大学2017届硕士研究生学位（毕业）论文30图3-3敲低ESM1抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭以及克隆形成。A，CCK8检测细胞增殖能力变化；B，平板克隆形成实验C，Transwell检测细胞迁移能力；D，Transwell检测细胞侵袭能力Fig.3-3ESM1knockdowndecreasescellproliferation,migration,invasionandcolonyformationonMDA-MB-231.A,CCK8detectsCellproliferationassay;B,Colonyformationassay.C,TranswelldetectsCellmigrationassay;D,TranswelldetectsCellinvasionassay;3.4shESM1抑制MDA-MB-468细胞增殖、迁移和侵袭MDA-MB-468细胞和MDA-MB-231细胞一样同为三阴性乳腺癌细胞，不同的是，MDA-MB-231细胞是高度侵袭的细胞，MDA-MB-468是中度侵袭的细胞。此前我们成功证明了shESM1抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭。为了进一步探索ESM1在三阴性乳腺癌中的作用，我们选择了三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞并成功构建了稳定敲低的shESM3细胞系。（图4A）。然后，使用MDA-MB-468ESM1敲低细胞和对照组细胞来检查细胞增殖，迁移和侵袭的能力（图4B-4C）。就如同在MDA-MB-231的结果一样，当在MDA-MB-468细胞中用shRNA敲低ESM1时，明显看到MDA-MB-468细胞在体外的增殖，
【参考文献】：
期刊论文
[1]Interleukin-8 associates with adhesion,migration,invasion and chemosensitivity of human gastric cancer cells[J]. Wen-Xia Kuai,Department of Pediatrics,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China Qiong Wang,Xiao-Zhong Yang,Department of Digestion,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China Yao Zhao,Ren Yu,Xiao-Jun Tang,Department of Gastrointestinal Surgery,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2012(09)
本文编号：3309803
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