食管癌中细胞自食的检测与IL-24抑瘤功能的初步研究

发布时间：2021-07-31 02:33

　　目的:细胞自食（cell-in-cell）是继坏死、凋亡、自噬之后的第四种细胞死亡方式,一些肿瘤组织标本中细胞自食的密度与肿瘤恶性程度正相关,提示细胞自食可能是肿瘤患者预后的一个指标。白细胞介素24（Interleukin 24,IL-24）具有广谱而特异的抗瘤活性,通过诱导肿瘤细胞凋亡和自噬抑制肿瘤增殖,对正常细胞几乎没有毒性影响。为了研究食管癌中细胞自食和探索IL-24抑瘤活性与细胞自食的相关性,本文检测了食管癌组织标本中细胞自食结构,并分析了 IL-24对食管鳞癌细胞体内外细胞自食的影响。方法:首先,收集75例食管癌患者配对组织标本（肿瘤组织,癌旁组织和正常组织）,用 EML（E-cadherin Macrophage Leukocyte）方法（即用 E-cadherin、CD45和CD68分别标记上皮细胞、白细胞和巨噬细胞）检测组织标本中的细胞自食结构,并用统计学方法分析细胞自食密度与食管癌患者临床信息和IL-24蛋白表达水平的相关性。其次,制备四种食管鳞癌细胞（KYSE140、KYSE150、KYSE450和KYSE510）的裸鼠移植瘤模型,分别用分泌表达rhIL-24的定点... 

【文章来源】：北京交通大学北京市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 细胞自食概念
    1.2 细胞自食的检测方法
    1.3 细胞自食结构形成的机制
    1.4 细胞自食与肿瘤发生发展进程的关系
    1.5 食管癌的治疗现状
    1.6 IL-24的生物学活性
    1.7 本研究目的和意义
2 材料
    2.1 细胞株
    2.2 试剂盒
    2.3 试剂
    2.4 试剂配制
    2.5 仪器设备
3 方法
    3.1 食管癌组织标本收集
    3.2 石蜡切片制备
        3.2.1 组织包埋
        3.2.2 切片
    3.3 H&E染色
    3.4 EML染色
    3.5 重组人IL-24蛋白的亲和层析纯化
        3.5.1 收集细胞上清
        3.5.2 亲和胶用前处理
        3.5.3 样品处理
        3.5.4 装柱
        3.5.5 洗杂蛋白
        3.5.6 洗脱目的蛋白
        3.5.7 亲和胶的用后处理
        3.5.8 纯化蛋白的超滤浓缩
    3.6 SDS-PAGE
    3.7 Western blot
    3.8 ELISA
    3.9 裸鼠荷瘤实验
    3.10 MTT实验
    3.11 细胞荧光染色
    3.12 统计学分析
4 结果
    4.1 食管癌组织标本中细胞自食与患者临床信息的相关性
        4.1.1 食管癌配对组织标本中细胞自食数量不同
        4.1.2 食管癌肿瘤组织中存在四种类型的细胞自食
        4.1.3 食管癌肿瘤组织中细胞自食密度与患者临床信息的相关性
    4.2 哺乳动物细胞表达的rhIL-24的纯化和鉴定
    4.3 rhIL-24抑制食管鳞癌细胞增殖
        4.3.1 表达rhIL-24工程细胞株对食管鳞癌细胞体内增殖的抑制
        4.3.2 rhIL-24对食管癌细胞体外增殖的抑制
    4.4 rhIL-24对不同食管鳞癌细胞自食的影响
        4.4.1 表达rhIL-24工程细胞株对食管鳞癌细胞体内自食的影响
        4.4.2 rhIL-24对食管鳞癌细胞体外细胞自食的影响
5 讨论
6 结论
参考文献
作者简历及攻读硕士学位期间取得的研究成果
学位论文数据集



本文编号：3312592