沉默CEACAM6对人胆囊癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响

发布时间：2021-08-04 05:19

　　目的:CEACAM6通过多种途径调控消化系统肿瘤的发生发展,但在胆囊癌中的作用未曾报道。本研究旨在探讨CEACAM6基因沉默对胆囊癌细胞系增殖,迁移,侵袭和凋亡的影响。为进一步胆囊癌基础研究提供依据。方法:GBC-SD和SGC-996细胞系在对数生长期进行实验。使用CEACAM6作为不同位点的靶标建立两种不同的si RNA重组表达载体。qRT-PCR和Western印迹分析分别用于检测CEACAM6的mRNA和蛋白表达。使用增强型CCK8细胞活力测定试剂和平板克隆实验检测细胞增殖。使用Transwell测定细胞迁移和侵袭的变化,并检测沉默CEACAMA6后细胞中侵袭相关蛋白的表达变化。应用流式细胞术测量细胞凋亡和细胞周期分布,并检测沉默CEACAMA6后凋亡相关蛋白变化。结果:CEACAM6 si RNA组中的CEACAM6 mRNA和蛋白表达显着低于NC组和空白组中的表达。与NC组相比,CEACAM6 si RNA组细胞增殖明显减少,但细胞凋亡率明显增加,CEACAM6si RNA组细胞凋亡相关蛋白Bax表达显著降低,抗凋亡蛋白Blc-2表达显著增加。此外,在CEACAM6 si R... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

用RT-PCR法检测CEACAM6敲击的效率

中国医科大学硕士学位论文10图2.A为用Westernblotting方法检测CEACAM6基因敲除效率。B为CEACAM6的蛋白表达，是靶蛋白与其相应的GAPDH蛋白的比值。实验数据为三个独立实验的平均±标准差，**P<0.01。3.2CEACAM6siRNA抑制SGC-996和GBC-SD细胞的增值实验分为NCsiRNA组和CEACAM6siRNA组，CCK-8测定结果和平板克隆形成实验结果显示(图3)，CEACAM6siRNA组随时间延长增殖能力逐渐减弱，差异有统计学意义（P<0.01）。另外，平板克隆实验展现相同的结果，提示敲低CEACAM6对胆囊癌细胞的增值有抑制作用。

中国医科大学硕士学位论文11图3（A）CCK8测定GBC-SD和SGC-996细胞3天数据变化，（B）GBC-SD细胞系转染CEACAM6siRNA和NCsiRNA后细胞集落数分析。（C）在SGC-996细胞中转染CEACAM6siRNA和NCsiRNA后细胞集落数分析。*P<0.05**P<0.01。3.3CEACAM6siRNA促进SGC-996和GBC-SD细胞的凋亡转染24小时后，各组细胞凋亡的结果（图4），CEACAM6siRNA组Q4象限凋亡细胞明显多于NC组，表明CEACAM6siRNA组的早期凋亡率显着高于NC组，差异有统计学意义（P<0.05）。Westernblot检测凋亡相关蛋白，与NC组相比，CEAAM6siRNA组抗凋亡蛋白Bcl-2明显减少而凋亡蛋白Bax明显增加，差异有统计学意义（P<0.01），提示CEACAM6基因沉默可促进GBC-SD和SGC-996细胞的凋亡。


本文编号：3321084