二甲双胍通过诱导细胞自噬和凋亡抑制糖尿病肾癌
发布时间：2021-08-12 08:32
背景:糖尿病和癌症同为慢性炎症性疾病,糖尿病人即使血糖控制良好,体内慢性炎症状况依然存在,这种炎症状况大大增加了肾细胞癌（Renal Cell Carcinoma,RCC）发生的危险性及死亡率。目前临床上肾细胞癌主要的治疗方法是手术切除,缺乏有效的药物治疗方案。因此,寻找兼有安全有效地拮抗肾癌的优化降糖方案对预防糖尿病合并RCC的发生具有重要意义。方法:（1）收集12例RCC患者,合并或不合并二型糖尿病（T2DM）的新鲜癌组织及相关临床病理资料,另选取14例RCC（合并或不合并T2DM）病例,收集其石蜡组织切片样本和相关临床病理资料。将组织标本分为两组,单纯RCC组和RCC合并糖尿病组。检测人肾癌组织中自噬相关蛋白、IGF-1及IGF-1R的表达情况。（2）在体外实验中用786-O及OS-RC-2两个肾癌细胞株作为肾细胞癌模型。以IGF-1（胰岛素样生长因子）刺激模拟糖尿病炎症微环境,加以不同剂量的二甲双胍处理,用流式细胞术,分子实验检测增殖、凋亡及自噬相关蛋白的表达。结果:（1）在12例RCC组织标本中,RCC合并T2DM肾癌组织中IGF-1及IGF-1R表达明显高于在单纯RCC组,...
【文章来源】：宁波大学浙江省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
肾癌诊断流程图
6 结果6.1 T2DM环境使RCC组织处于自噬受抑制状态首先，采用HE 染色明确肾细胞癌病理改变。如图2 所示，配对癌旁组织镜下可见肾皮质中有许多大小不等散在分布的肾小球，周围密布肾小管横断面。细胞排列整齐，管腔清晰。而肾肿瘤由透明细胞构成，细胞体积较大，具有丰富的透明胞质，核呈卵圆形，较为一致。为了探索肾细胞癌病人肾癌组织中自噬相关蛋白LC3B 是否存在表达差异，我们采用 Western Blot 法和免疫荧光染色检测RCC 患者在合并或不合并T2DM 时，肾癌组织中 LC3B 的蛋白水平。结果发现合并T2DM 的RCC 患者肾癌组织中LC3B 蛋白的表达水平低于单纯RCC 患者肾癌组织（图 3.1），免疫荧光结果观察到RCC 伴T2DM 组肾癌组织切片中 LC3B 的免疫荧光信号显著少于单纯RCC 组肾癌组织切片（图3.2）。这些结果表明在合并T2DM 的 RCC 患者肾癌组织中自噬相关蛋白的表达较少
图3 T2DM 患者的RCC 组织中LC3B 蛋白的表达量下调。①Western Blot 法检测合并（RCC+DM+）或不合并（RCC+ DM-）T2DM 的 RCC 患者肾癌组织中 LC3B 蛋白的表达水平。②免疫荧光分析合并（RCC+ DM+）或不合并（RCC+ DM-）T2DM 的RCC 患者肾癌组织中LC3B 的表达差异。LC3B 以白色箭头标示。免疫荧光图片拍摄于630x，20 μm 比例尺表示。Figure. 3 The expression of autophagy related proteins are decreased in the RCCtissues of T2DM patients. ① Protein levels of autophagy-related proteins LC3 in RCCtumor tissues from patients with (RCC+ DM+) or without (RCC+ DM-) T2DM. ②Representative images of immunofluorescence analysis of LC3 in RCC tissues from patientswith (RCC+ DM+) or without (RCC+ DM-) T2DM. LC3B was indicated by white arrow.Immunofluorescence photo were taken at 630x, scale bar indicates 20 μm.6.2 二甲双胍可以激活786-O细胞发生自噬为了阐明二甲双胍对自噬的调控作用，本课题分别用电子显微镜，自噬慢病毒和Western blot 自噬相关蛋白分析检测自噬水平。我们使用不同浓度的二甲双胍（0、1、5 或10 mM）处理786-O 细胞（人RCC 细胞株）。如图 4.1 所示，二甲双胍可以促进
本文编号：3337983
【文章来源】：宁波大学浙江省
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
肾癌诊断流程图
6 结果6.1 T2DM环境使RCC组织处于自噬受抑制状态首先，采用HE 染色明确肾细胞癌病理改变。如图2 所示，配对癌旁组织镜下可见肾皮质中有许多大小不等散在分布的肾小球，周围密布肾小管横断面。细胞排列整齐，管腔清晰。而肾肿瘤由透明细胞构成，细胞体积较大，具有丰富的透明胞质，核呈卵圆形，较为一致。为了探索肾细胞癌病人肾癌组织中自噬相关蛋白LC3B 是否存在表达差异，我们采用 Western Blot 法和免疫荧光染色检测RCC 患者在合并或不合并T2DM 时，肾癌组织中 LC3B 的蛋白水平。结果发现合并T2DM 的RCC 患者肾癌组织中LC3B 蛋白的表达水平低于单纯RCC 患者肾癌组织（图 3.1），免疫荧光结果观察到RCC 伴T2DM 组肾癌组织切片中 LC3B 的免疫荧光信号显著少于单纯RCC 组肾癌组织切片（图3.2）。这些结果表明在合并T2DM 的 RCC 患者肾癌组织中自噬相关蛋白的表达较少
图3 T2DM 患者的RCC 组织中LC3B 蛋白的表达量下调。①Western Blot 法检测合并（RCC+DM+）或不合并（RCC+ DM-）T2DM 的 RCC 患者肾癌组织中 LC3B 蛋白的表达水平。②免疫荧光分析合并（RCC+ DM+）或不合并（RCC+ DM-）T2DM 的RCC 患者肾癌组织中LC3B 的表达差异。LC3B 以白色箭头标示。免疫荧光图片拍摄于630x，20 μm 比例尺表示。Figure. 3 The expression of autophagy related proteins are decreased in the RCCtissues of T2DM patients. ① Protein levels of autophagy-related proteins LC3 in RCCtumor tissues from patients with (RCC+ DM+) or without (RCC+ DM-) T2DM. ②Representative images of immunofluorescence analysis of LC3 in RCC tissues from patientswith (RCC+ DM+) or without (RCC+ DM-) T2DM. LC3B was indicated by white arrow.Immunofluorescence photo were taken at 630x, scale bar indicates 20 μm.6.2 二甲双胍可以激活786-O细胞发生自噬为了阐明二甲双胍对自噬的调控作用，本课题分别用电子显微镜，自噬慢病毒和Western blot 自噬相关蛋白分析检测自噬水平。我们使用不同浓度的二甲双胍（0、1、5 或10 mM）处理786-O 细胞（人RCC 细胞株）。如图 4.1 所示，二甲双胍可以促进
本文编号：3337983
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