第一部分：蛋白酶活化受体2调控结直肠癌细胞Bcl-xL的分子机制和功能研究 第二部分：水飞蓟宾预防小鼠结肠炎相关结肠癌的
发布时间：2021-08-23 12:23
第一部分:蛋白酶活化受体2调控结直肠癌细胞Bcl-xL的分子机制和功能研究Bcl-xL是Bcl-2蛋白家族中的抗凋亡蛋白之一,在调控细胞凋亡、细胞自噬和肿瘤代谢等方面都具有重要作用。有大量研究报道Bcl-xL在结直肠癌中高表达,但是关于其在结直肠癌中高表达的分子机制却不明了。另一方面,肠道存在其特有的微环境,肠道中含有丰富的胰蛋白酶类,能够激活细胞膜上的一个七次跨膜的G蛋白偶联受体蛋白酶活化受体2（protease-activated receptor 2,PAR2）。本研究的目的是:明确PAR2信号是否调控Bcl-xL的表达,研究其调控的分子机制并初步探索其在结直肠癌治疗中潜在的应用价值。首先我们发现在多个结直肠癌的数据库和细胞系中Bcl-xL与PAR2的表达水平呈显著正相关。特异性激活PAR2信号通路可以显著上调多个细胞系中Bcl-xL的蛋白表达水平,而非mRNA水平。进一步的研究发现激活PAR2显著延长了 Bcl-xL蛋白的半衰期,而抑制该通路则显著增加了Bcl-xL蛋白的降解。此外,只有蛋白酶体抑制剂,而非溶酶体和caspase的抑制剂,可以阻断PAR2缺失导致的Bcl-xL蛋...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：120 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．数据库来源的结直肠癌临床样本中ＰＡＲ２和Ｂｃｌ－ｘＬ的ｍＲＮＡ表达水平显著正相关
２０１５），因此我们还检测了上述细胞系中胰蛋白酶原（Ｔｒｙｐｓｉｎｏｇｅｎ）和ＫＬＫ１４的??ｍＲＮＡ表达量。对结果进行定量分析发现ＰＡＲ２和Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平在这些细??胞系中也是显著正相关（图２，?ｐ＜０．０５）。以上结果提示我们，ＰＡＲ２有可能调??控Ｂｃｌ－ｘＬ的表达。??３９??
Ｃａｃｏ－２还是在研宄ＰＡＲ２的经典细胞模型Ａ５４９中，亦或是在代表正常上皮细??胞的ＨＥＫ－２９３／ＨＥＫ－２９３Ｔ中，ＰＡＲ２－ＡＰ处理之后都能够显著增加Ｂｄ－ｘＬ的蛋??白水平（图３），提示激活ＰＡＲ２能够上调Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。??Ａ?Ｂ??Ａ５４９?ＰＡＲ２－ＡＰ??（ａｃｏ－２?ＰＡＲ２－ＡＰ??ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ?３ｈ??ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ?３ｈ?？?．．??Ｂｄ－ｘＬ?１?｜?Ｂ叫?一?一一??Ｐ－ａｃｔｉｎ?｜?－???＜１?一十?＞、■?，一％—？??Ｃ?Ｄ??ＨＥＫ?２９３?ＰＡＲ２?ＡＰ?ＨＥＫ?２９３ＴＰＡＲ２?ＡＰ??ｃｏｎ?ｉｂ?２ｂ?３ｂ?４ｈ?ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ??｜＜—？?ｍｔｍ?ｍａｍ?ｂｃｉ—ｘｌ?｜?｜??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｊ?＾?｜?Ｐ－ａｃｔｉｎ?｜?－?ｊ??图３．在不同的细胞系中激活ＰＡＲ２都能显著增加Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。Ｃａｃｏ－２、Ａ５４９、??ＨＥＫ－２９３和ＨＥＫ－２９３Ｔ（图Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）分别用无血清培养基饥饿过夜后，加入１０〇ｎＭＰＡＲ２??特异性激活肽（ＰＡＲ２－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ?ｐｅｐｔｉｄｅ，?ＰＡＲ２－ＡＰ）处理Ｍ小时后裂解细胞提取总蛋白，??ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。Ｐ－ａｃｔｉｎ作为蛋白内参。??４０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He. Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)
本文编号：3357859
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：120 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．数据库来源的结直肠癌临床样本中ＰＡＲ２和Ｂｃｌ－ｘＬ的ｍＲＮＡ表达水平显著正相关
２０１５），因此我们还检测了上述细胞系中胰蛋白酶原（Ｔｒｙｐｓｉｎｏｇｅｎ）和ＫＬＫ１４的??ｍＲＮＡ表达量。对结果进行定量分析发现ＰＡＲ２和Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平在这些细??胞系中也是显著正相关（图２，?ｐ＜０．０５）。以上结果提示我们，ＰＡＲ２有可能调??控Ｂｃｌ－ｘＬ的表达。??３９??
Ｃａｃｏ－２还是在研宄ＰＡＲ２的经典细胞模型Ａ５４９中，亦或是在代表正常上皮细??胞的ＨＥＫ－２９３／ＨＥＫ－２９３Ｔ中，ＰＡＲ２－ＡＰ处理之后都能够显著增加Ｂｄ－ｘＬ的蛋??白水平（图３），提示激活ＰＡＲ２能够上调Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。??Ａ?Ｂ??Ａ５４９?ＰＡＲ２－ＡＰ??（ａｃｏ－２?ＰＡＲ２－ＡＰ??ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ?３ｈ??ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ?３ｈ?？?．．??Ｂｄ－ｘＬ?１?｜?Ｂ叫?一?一一??Ｐ－ａｃｔｉｎ?｜?－???＜１?一十?＞、■?，一％—？??Ｃ?Ｄ??ＨＥＫ?２９３?ＰＡＲ２?ＡＰ?ＨＥＫ?２９３ＴＰＡＲ２?ＡＰ??ｃｏｎ?ｉｂ?２ｂ?３ｂ?４ｈ?ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ??｜＜—？?ｍｔｍ?ｍａｍ?ｂｃｉ—ｘｌ?｜?｜??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｊ?＾?｜?Ｐ－ａｃｔｉｎ?｜?－?ｊ??图３．在不同的细胞系中激活ＰＡＲ２都能显著增加Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。Ｃａｃｏ－２、Ａ５４９、??ＨＥＫ－２９３和ＨＥＫ－２９３Ｔ（图Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）分别用无血清培养基饥饿过夜后，加入１０〇ｎＭＰＡＲ２??特异性激活肽（ＰＡＲ２－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ?ｐｅｐｔｉｄｅ，?ＰＡＲ２－ＡＰ）处理Ｍ小时后裂解细胞提取总蛋白，??ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。Ｐ－ａｃｔｉｎ作为蛋白内参。??４０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He. Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)
本文编号：3357859
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