云南肺癌组织中RASSF1A/TBX5基因甲基化与环境致癌因素的相关性研究

发布时间：2021-08-25 17:59

　　肺癌（lung cancer, LC）是全球最常见的恶性程度较高的原发性肿瘤。据世界卫生组织的统计资料显示,2012年全世界新增癌症患者大约有1410万例,其中肺癌患者有180万人,占癌症新增病例的13%。肺癌是全球男性癌症中发病率和死亡率最高、也是发达国家女性癌症死亡率最高的疾病。在云南宣威、富源等地,肺癌的发病率在全国所有城市中排在首位,并具有女性的发病率远远高于男性的特点。而针对宣威肺癌发病原因的大量研究结果显示,导致肺癌高发的环境原因主要是使用当地出产的烟煤所造成的室内空气以及大气污染,其中包含主要的环境致癌物多环芳烃。由于环境污染的加剧和人口的快速增长以及老龄化等因素的作用,加之临床缺乏有效的肺癌早期诊断的生物标志物,使得大多数肺癌患者在确诊时已是中晚期。进而导致肺癌的发病率和死亡率仍在逐年增加,其五年生存率已不足17%。因此,开发有效的早期诊断的生物标志物对于肺癌的早发现早治疗至关重要,是改善肺癌预后和提高生存率的关键。研究表明,人类肿瘤的发生和发展与异常的DNA甲基化具有显著的相关性,并且肿瘤相关基因的甲基化异常现象在细胞癌变之前就已经发生了,能够作为很好的肿瘤筛查和早期... 

【文章来源】：昆明理工大学云南省

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略表
第一章 绪论
    1.1 癌症及肺癌的现状
    1.2 肺癌的分类和分期
    1.3 肺癌的早期诊断和治疗方法
        1.3.1 肺癌的早期诊断
        1.3.2 肺癌的治疗方法
    1.4 表观遗传学和DNA甲基化
        1.4.1 表观遗传学
        1.4.2 DNA甲基化
        1.4.3 DNA甲基化的检测方法
        1.4.4 DNA甲基化和肿瘤
    1.5 环境致癌因素
        1.5.1 环境致癌因素种类
        1.5.2 多环芳烃类物质对肺癌的危害
        1.5.3 BPDE-DNA加合物的检测方法
    1.6 云南宣威肺癌的概述
    1.7 本课题的研究目的及意义
第二章 肺癌组织中RASSF1A和TBX5基因甲基化的检测
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验样本和细胞
        2.2.2 实验主要耗材
        2.2.3 实验主要试剂
        2.2.4 主要实验仪器
        2.2.5 主要试剂配置方法
    2.3 实验方法
        2.3.1 肺癌组织样本收集
        2.3.2 A549细胞培养
        2.3.3 石蜡包埋与切片
        2.3.4 HE染色
        2.3.5 FFPE组织DNA提取
        2.3.6 核酸定量
        2.3.7 重亚硫酸氢盐转化
        2.3.8 普通PCR
        2.3.9 琼脂糖凝胶电泳
        2.3.10 PCR产物纯化
        2.3.11 基因克隆
        2.3.12 菌落PCR
        2.3.13 测序结果分析
        2.3.14 统计学分析
    2.4 实验结果和讨论
        2.4.1 肺癌组织样本统计
        2.4.2 肺癌FFPE组织DNA提取
        2.4.3 RASSF1A/TBX5基因启动子预测和引物设计
        2.4.4 RASSF1A/TBX5目的基因扩增和克隆
        2.4.5 重亚硫酸盐测序结果
        2.4.6 RASSF1A/TBX5基因在所有肺癌样本中的甲基化频率
        2.4.7 RASSF1A/TBX5基因在肺癌和癌旁组织中的甲基化水平
        2.4.8 RASSF1A/TBX5基因的CpG位点甲基化情况
        2.4.9 RASSF1A/TBX5基因甲基化和肺癌临床特征的相关性分析
    2.5 讨论
    2.6 小结
第三章 BPDE-DNA加合物在肺癌组织中的检测
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 主要实验耗材
        3.2.2 主要实验仪器
        3.2.3 主要实验试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 免疫荧光
        3.3.2 分析方法
    3.4 实验结果
        3.4.1 BPDE-DNA加合物在肺癌组织细胞中的定位
        3.4.2 BPDE-DNA加合物与肺癌患者临床特征的相关性分析
        3.4.3 肺癌中BPDE-DNA加合物和DNA甲基化之间的关系
    3.5 讨论
    3.6 小结
第四章 总结和展望
    4.1 总结
    4.2 展望
致谢
参考文献
附录A 攻读硕士期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]宣威肺癌的致病环境因子研究和诊治进展[J]. 任永永,孔祥阳,伍超群,吕云辉.  肿瘤. 2015(04)
[2]宣威女性肺癌患者肺组织中PAHS-DNA加合物的表达[J]. 杨凯云,黄云超,赵光强,雷玉洁,王昆.  中国肺癌杂志. 2010(05)
[3]肺癌的治疗现状[J]. 白春学,张新.  中华结核和呼吸杂志. 2006(03)
[4]三种肺癌组织学分类比较[J]. 李维华.  中国肺癌杂志. 2000(06)



本文编号：3362592